判斷細胞是否成功建立了系通常涉及以下幾個步驟：

一、形態學與生長特性觀察?

?形態變化?：永生化細胞通常比原代細胞更大、核質比更高，且排列無序（如成纖維細胞從梭形變為多形性）。

?生長曲線?：連續傳代后，細胞應保持穩定的倍增時間（如24-48小時），且無生長停滯現象。

二、?分子生物學鑒定?

?STR基因分型?：通過短串聯重復序列（STR）分析，比對數據庫確認細胞身份，排除交叉污染。

?端粒酶活性檢測?：永生化細胞通常端粒酶（TERT）陽性，可通過TRAP法或qPCR驗證。

三、?功能與穩定性測試?

?長期傳代能力?：連續傳代50代以上仍保持增殖能力，且無衰老跡象（如SA-β-Gal染色陰性）。

?致瘤性實驗?：軟瓊脂克???形成或裸鼠成瘤試驗可驗證惡性轉化（僅適用于腫瘤細胞系）。

四、?遺傳穩定性分析?

?染色體核型檢查?：中期染色體計數應保持穩定（如人類細胞系為46條），無顯著非整倍體或結構異常。

?外源基因表達?：若通過病毒載體（如慢病毒）導入永生化基因（如SV40大T抗原），需通過Western blot或**熒光確認蛋白表達。

五、細胞倍增時間

記錄細胞的倍增時間（doubling time），即細胞分裂一次所需的時間。穩定的細胞系通常具有可預測的倍增時間。

六、細胞遺傳學分析

核型分析：通過核型分析檢查細胞的染色體數目和結構，確保沒有異常的染色體變化。

STR（短串聯重復）鑒定：對于人源和小鼠細胞系，STR分型是確認細胞系身份和檢測交叉污染的重要方法。通過比對STR位點，可以驗證細胞系的遺傳一致性。

通過這些綜合性的檢測，可以有效地判斷細胞系是否成功建立并保持穩定。