實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織完全被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

我司全程提供細胞生物體、生長特性、來源、器官、類型、形態、培養條件、應用、組織、凍存條件等復蘇及凍存細胞株說明書信息，我們專業您的細胞系實驗，讓您實驗再無煩擾！

英文簡稱：LSCS-1細胞

產品名稱：大鼠肝星形細胞

貨號：BJ-01X10524

規格：肝星形細胞；自發永生；Wistar

形態特性:DMEM

生長特性:貼壁

細胞傳代步驟： 
如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中??置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

實驗要點及說明 :

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法； 

2．所使用的蓋玻片應該為玻璃**，并經過鉻酸洗液處理； 

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕； 

4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率； 

5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

培養操作:

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過夜）。天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。      

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時，棄去培養基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

使用方法：

收到細胞后，請按照以下方法進行操作。

1. 取出25cm2培養瓶，75%酒精，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細胞培養箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩定細胞狀態。

2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養。

3. 細胞傳代

1) 吸出25cm2培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次；

2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入完全培養液終止消化；

3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當的比例進行接種傳代，然后補充新鮮的完全培養基至5mL，放入37℃，5% CO2細胞培養箱中培養；

4) 待細胞完全貼壁后，培養觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的完全培養基。

HEXDC  氨基己糖苷酶D抗體規格: 0.2ml

HHLA2  HHLA2蛋白抗體規格: 0.2ml

KIAA1576/VAT1L  囊泡胺轉運蛋白1家族蛋白抗體規格: 0.2ml

BOLA1  BOLA1蛋白抗體規格: 0.2ml

BOLA2  BOLA2蛋白抗體規格: 0.2ml

BPIL1  通透性增加蛋白樣1抗體規格: 0.2ml

BPIL2  /通透性增加蛋白樣2抗體規格: 0.2ml

BPIL3  /通透性增加蛋白樣3抗體規格: 0.2ml

BRD1  BRD1蛋白抗體規格: 0.2ml

BRP44  腦蛋白44抗體規格: 0.2ml

BRP44L  腦蛋白44樣蛋白抗體規格: 0.2ml

BRPF3  BRPF3蛋白抗體規格: 0.2ml

LMO2  T  易位蛋白2抗體規格: 0.2ml

大鼠肝星形細胞銀杏酸 C15-1 Ginkgolic Acid C15-1 22910-60-7 10mg

1瓶 PC 61 5.3 [PC 61; PC61.5.3]  株 PC 61 5.3 [PC 61; PC61.5.3] 低溫運輸和保存

葡萄糖銨培養基 用于鑒別細利用銨鹽作為**氮源并分解葡萄糖的試驗。 100g

沙門、志賀屬瓊脂培養基(SS)  250g

1000mL Tris Buffered Saline(TBS),10X  Tris Buffered Saline(TBS),10X  常溫保存

1 管 Rosetta(DE5)大腸桿  

50000U MMLV逆轉錄酶 MMLV Reverse Transcriptase -20℃保存

志賀氏顯色培養基 志賀氏顯色培養基 1000ml/瓶

30次 一站式Tricine-SDS-PAGE套裝 One-Stop Tricine-SDS-PAGE Pack 常溫保存（上樣液需要-20℃保存）

大薊苷 Pectolinarin 28978-02-1 20mg

1%NaCl賴氨酸脫羧酶生化鑒定管 用于鑒別耐氯化鈉的弧賴氨酸氨基酸脫羧基形成胺使培養基變堿的能力。 20支/盒

2 ug pPICZ C pPICZ C 低溫運輸，-20℃保存

莪術呋喃二烯酮 Furanodienon 24268-41-5 10mg

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