1． 加樣方面（混勻，不要有氣泡，管壁上不要有液體） 

2． 試劑方面（冷凍，不宜反復凍融超過3次；可分裝） 

3． 使用非肝素鈉抗凝劑采血管 

4． 實驗室方面（實驗做完注意通風、84清理臺面、紫外線**） 

5． 注意污染（平常配試劑管蓋的放置不要污染、加樣時指甲及手套不要碰到管內壁） 

實驗操作步驟

1.室溫融解；

2.取 血清（或標準品）50ul 加入 50ul 核酸提取液 先 震蕩混勻10秒 然后 6000轉瞬間離心一下（等離心機轉速到了接近6000按停止）99度水煮或干浴10分鐘，稍微彈碎；然后13000轉離心10分鐘保留上清液備用 

3.配混合液 

  取 N*36ul 混合液 + N*0.4ul TAQ酶混勻 （先 震蕩混勻10秒 然后 6000轉瞬間離心） （N為管數，實際上我們要取N+1 因為加樣管壁上會沾液不多配會導致*后一個有誤差 例如有10個樣本則取11*36+11*0.4；） 

4.取上述混合液36.5ul分別加入pcr反應管 不要有氣泡 管壁不要有水珠

5.加樣 取4ul上清液 加入pcr管  加樣槍在液體里面反復打個7~8下  *后在離心機 稍微離一下6000轉瞬間離心 6.上機反應  檢查管壁水珠 氣泡

實驗結果方面

1.標準曲線相關系數至少為-0.99  越小越好

2.根據曲線分析結果（曲線是否穩，無波浪）38循環曲線抬頭為陰性

實線抬頭 曲線不抬頭為YMDD變異 （實線---病毒量  虛線---判斷有無變異）

  21個循環值大概為7次方 后面加3.5個循環 減少一個次方  即24.5左右為6次方...... 

友情提示：上述操作不一定全正確，請自行參考各試劑廠試劑說明書以及檢驗方面相關資料。

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