冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液??槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

產品描述：公司科技提供的原代細胞均來自新鮮組織，用于培養該細胞的組織采集是根據國際標準方案進行。細胞的培養采用公司PrimaCellTM原代細胞培養試劑盒來優化目的細胞生長條件，以降低雜細胞的污染，同時保證質量的穩定。在公司技術部標準的操作流程下，原代細胞可以保持分化狀態，進而可以用于評估體外模型系統和調節特定基因的遺傳功能。

發貨：客戶可根據自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養瓶和相應的細胞密度。公司科技提供的細胞有標準的鑒定流程，保證細胞的純度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和等。發貨的新鮮細胞還包含:1、發貨的T25方瓶中裝滿50ml左右完全培養基；2、說明書及注意事項；3、公司科技售后服務標準。

保存和應用：客戶可以根據自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞，如是新鮮原代細胞，客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養箱內靜置后2-3h，再進行后續的實驗操作。如是凍存細胞，客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研。

細胞培養步驟：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1） 準備DMEM-H培養基(GIBCO,貨號1199500bt，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根據實驗需要選擇懸浮培養基，使293T細胞懸浮生長。
2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%完全培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二． 細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

注意事項：
1. 接收到細胞，肉眼觀察細胞培養基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收到時的培養瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精（建議配置75%的酒精的水是過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶。
4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管完全吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養基培養細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養瓶，37℃，5%CO2培養。 

無蛋白酶牛血清白蛋白  Albumin, from bovine Protease free  質量規格：>98%,分子生物學級 鈣離子膜通道內質網肌醇1,4,5-三0酸受體(IP3R)功能熒光檢測試劑盒20

硬脂酸鋁  Aluminum stearate  質量規格：AR 鈣離子膜通道內質網利羅丁受體(ryanodinereceptor;RyR)功能熒光檢測試劑盒20

鉍試劑III(>99%,BR)  Bismuth(III) nitrate pentahydrate  質量規格：>99%,BR 鈣鎂0酸平衡鹽(PBS)緩沖溶液500毫升

氫鈣二水(>98%,BR)  Calcium phosphate, dibasic, dihydrate  質量規格：>98%,BR 鈣調蛋白結合檢測試劑盒篩選5

碳酸鈰  Cerium(III) carbonate, hydrate  質量規格：>99.9%,AR 鈣轉感受態制備試劑盒1

胰凝乳蛋白酶原 A  Chymotrypsinogen A  質量規格：酶活：>1500 U/mg,BC 甘油(glycerol)含量酶連續循環反應比色法定量檢測試劑盒20

汽巴藍  Cibacron blue 3G-A  質量規格：ACS Grade 肝素(heperin)活性比色法定量檢測試劑盒20

DEAE葡聚糖  DEAE Dextran  質量規格：BR 肝素(heperin)活性比色法定量檢測試劑盒20

氟啶酮(>98%,植物級)  Fluridone  質量規格：>98%,植物級 肝素(heperin)纖維蛋白檢測法(Fibrometer)分析試劑盒50

組胺(>98%,BC)  Histamine  質量規格：>98%,BC 肝素血液抗凝液100毫升
小鼠支氣管成纖維細胞提取物【Mouse Airway: Normal Bronchial Fibroblast Derivatives】 規格50rxn/ 5μg/ 200μg

小鼠肺大靜脈內皮細胞提取物【Mouse Lung: Normal Vein Endothelial Cell Derivatives】 規格50rxn/ 5μg/ 200μg

小鼠氣管和支氣管上皮細胞提取物 【Mouse Airway: Normal Bronchial and Tracheal Epithelial Cell Derivatives】 規格50rxn/ 5μg/ 200μg
1229652-21-4  HA 130  50mg  Pseudomonas fabae蠶豆假單胞菌PCR試劑盒  植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒

1229652-22-5  HA-155  10mg  Pseudomonas cichorii菊苣假單胞菌PCR試劑盒  植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒

1229652-22-5  HA-155  1mg  Pseudomonas cissicola青紫葛假單胞菌PCR試劑盒  植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒

1229652-22-5  HA-155  25mg  Pseudomonas cichorii菊苣假單胞菌PCR試劑盒  植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒

1229652-22-5  HA-155  5mg  Pseudomonas cissicola青紫葛假單胞菌PCR試劑盒  植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒
細胞培養的優點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中，根據要求可始終保持細胞活力，并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態、結構、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.真皮成纖維細胞研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養一定代數后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。

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