冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超???1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

PBS緩沖液

英文名稱：PBS

規格：500ml

產品描述：公司科技提供的原代細胞均來自新鮮組織，用于培養該細胞的組織采集是根據國際標準方案進行。細胞的培養采用公司PrimaCellTM原代細胞培養試劑盒來優化目的細胞生長條件，以降低雜細胞的污染，同時保證質量的穩定。在公司技術部標準的操作流程下，原代細胞可以保持分化狀態，進而可以用于評估體外模型系統和調節特定基因的遺傳功能。

發貨：客戶可根據自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養瓶和相應的細胞密度。公司科技提供的細胞有標準的鑒定流程，保證細胞的純度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和等。發貨的新鮮細胞還包含:1、發貨的T25方瓶中裝滿50ml左右完全培養基；2、說明書及注意事項；3、公司科技售后服務標準。

保存和應用：客戶可以根據自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞，如是新鮮原代細胞，客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養箱內靜置后2-3h，再進行后續的實驗操作。如是凍存細胞，客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研。

細胞培養步驟：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1） 準備DMEM-H培養基(GIBCO,貨號1199500bt，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根據實驗需要選擇懸浮培養基，使293T細胞懸浮生長。
2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%完全培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二． 細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

注意事項：
1. 接收到細胞，肉眼觀察細胞培養基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收到時的培養瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精（建議配置75%的酒精的水是過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶。
4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管完全吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養基培養細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養瓶，37℃，5%CO2培養。 

鎢標準溶液(1000μg/ml,基體：0.1mol/LNaOH)質量規格：1000μg/ml,基體：0.1mol/LNaOHTungsten solution  英文名稱RatMBPELISAKit大鼠髓1脂堿蛋白(MBP)規格：96T/48T  Jo1抗體/抗組酰NA合成酶抗體(Jo1/HRS)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

**咪酯(標準品)質量規格：>98%,標準品Etomidate  化妝品氨熒光定量檢測試劑盒20  兔胰淀素(Amylin)試劑盒 Rabbit Amylin ELISA Kit

N-乙酰神經氨酸/唾液酸質量規格：度≥98.0%N-Acetyl Neuraminic Acid/NANA/Neu5Ac/SA  ELISAKitACE血管緊張素轉化酶規格：48T/96T  鞘醇激酶1(SPK1)ELISA試劑盒 ，英文名： SPK1 ELISA Kit

紅霉素質量規格：≥850 μg/mg,BRErythromycin  小鼠海藻糖酶(EH)ELISA試劑盒 ，英文名： EH ELISA Kit  RabbitD-Dimer,D2DELISA試劑盒兔子D二聚體(D2D)ELISA試劑盒規格：96T/48T
三白草酮（標準品）Sauchinone質量規格：HPLC≥98%，標準品  Mouselipoproteinlipase,LPLELISA試劑盒小鼠脂蛋白脂酶(LPL)ELISA試劑盒規格：96T/48T  胰島素抗體(Ai-Ins)ELISA試劑盒 ，英文名： Ai-Ins ELISA Kit

肝素鈉/肝1脂鈉鹽Heparin 質量規格：細胞培養級，效價≥180IU/mg  小鼠熱休克蛋白40(HSP40)ELISA試劑盒 ，英文名： HSP40 ELISA Kit  MouseAquaporin2,AQP-2ELISA試劑盒小鼠水通道蛋白2(AQP-2)ELISA試劑盒規格：96T/48T

羥乙基-β-環糊精HE-β-CD質量規格：BR,>98%,藥用級  豬胰島素(INS)ELISA檢測試劑盒PorcineInsulin,INSELISAKit 96T/48T  ELISAKitIL-7小鼠白介素7規格：48T/96T

奈福泮/鹽酸平痛新Nefopam HCl質量規格：>99%,CP  大鼠晝夜節律蛋白同源物2(PER2)試劑盒 Rat Period circadian protein homolog 2,PER2 ELISA kit  GoatIerleukin4,IL-4ELISAKit山羊白介素4(IL-4)ELISA試劑盒規格：96T/48T
大鼠心肌成纖維細胞保存 規格5×105

大鼠心房肌細胞培養 規格5×105

大鼠小腦組織提取物【Brain: Normal Rat Cerebellar Derivatives】 規格50rxn/ 10μg/ 200μg
細胞培養的優點：
1.PBS緩沖液研究的對象是活細胞
在實驗過程中，根據要求可始終保持細胞活力，并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態、結構、生命活動等。
2.研究條件可以為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據實際需要進行為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養一定代數后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。

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