冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

描述：(1)公司可提供新鮮或凍存細(xì)胞株；(2)細(xì)胞株數(shù)量約 5×105/瓶；(3)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、酵母。
     發(fā)貨：客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右完全培養(yǎng)基；2、說(shuō)明書及注意事項(xiàng)；3、售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
     保存和應(yīng)用：客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞，如是新鮮細(xì)胞株，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h，再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1） 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號(hào)1199500bt，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇懸浮培養(yǎng)基，使293T細(xì)胞懸浮生長(zhǎng)。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二． 細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。天換液并檢查細(xì)胞密度。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

注意事項(xiàng)：
1. 接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精（建議配置75%的酒精的水是過(guò)的）。
3.嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無(wú)菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。 

鹽酸克林霉素(標(biāo)準(zhǔn)品)  Clindamycin HCl  質(zhì)量規(guī)格：>800μg/mg,含量測(cè)定 冰凍切片組織CASPASE-3蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20

鹽酸維拉帕米  Verapamil HCl  質(zhì)量規(guī)格：>99%,USP32,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng) 冰凍切片組織CASPASE-4蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20

鹽酸維拉帕米（標(biāo)準(zhǔn)品）  Verapamil HCl  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 冰凍切片組織CASPASE-5蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20

霉酚酸; 麥考酚酸;MPA  Mycophenolic acid  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 冰凍切片組織CASPASE-6蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20

霉酚酸; 麥考酚酸（標(biāo)準(zhǔn)品）  Mycophenolic acid  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>97%,標(biāo)準(zhǔn)品 冰凍切片組織CASPASE-7蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20

阿莫西林/羥氨芐青霉素  Amoxicillin   質(zhì)量規(guī)格：BR級(jí)，可用于細(xì)胞培養(yǎng)，度99%以上,三水合物,USP30 冰凍切片組織CASPASE-8蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20

阿莫西林（標(biāo)準(zhǔn)品）  Amoxicillin   質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定 冰凍切片組織CASPASE-9蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20

非諾貝特  Fenofibrate  質(zhì)量規(guī)格：>99%,EP6.0 冰凍切片組織CDK2蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20

非諾貝特（標(biāo)準(zhǔn)品）  Fenofibrate  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 冰凍切片組織CDK3蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20

丙磺舒  Probenecid  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 冰凍切片組織CDK4蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20
冰凍切片組織CASPASE-2蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20 鹽酸克林霉素  Clindamycin HCl  質(zhì)量規(guī)格：>800μg/mg,USP,BR

冰凍切片組織CASPASE-3蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20 鹽酸克林霉素(標(biāo)準(zhǔn)品)  Clindamycin HCl  質(zhì)量規(guī)格：>800μg/mg,含量測(cè)定

冰凍切片組織CASPASE-4蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20 鹽酸維拉帕米  Verapamil HCl  質(zhì)量規(guī)格：>99%,USP32,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

冰凍切片組織CASPASE-5蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20 鹽酸維拉帕米（標(biāo)準(zhǔn)品）  Verapamil HCl  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

冰凍切片組織CASPASE-6蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20 霉酚酸; 麥考酚酸;MPA  Mycophenolic acid  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

冰凍切片組織CASPASE-7蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20 霉酚酸; 麥考酚酸（標(biāo)準(zhǔn)品）  Mycophenolic acid  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>97%,標(biāo)準(zhǔn)品

冰凍切片組織CASPASE-8蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20 阿莫西林/羥氨芐青霉素  Amoxicillin   質(zhì)量規(guī)格：BR級(jí)，可用于細(xì)胞培養(yǎng)，度99%以上,三水合物,USP30

冰凍切片組織CASPASE-9蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20 阿莫西林（標(biāo)準(zhǔn)品）  Amoxicillin   質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定

冰凍切片組織CDK2蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20 非諾貝特  Fenofibrate  質(zhì)量規(guī)格：>99%,EP6.0

冰凍切片組織CDK3蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20 非諾貝特（標(biāo)準(zhǔn)品）  Fenofibrate  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
大鼠腎足突基底膜組織提取物【Kidney: Normal Rat Kidney Foot Process Basement Membrane Derivatives】 規(guī)格50rxn/ 10μg/ 200μg

大鼠腎組織提取物【Kidney: Normal Rat Kidney Derivatives】 規(guī)格50rxn/ 10μg/ 200μg

大鼠腎動(dòng)脈組織提取物【Kidney: Normal Rat Renal Artery Derivatives】 規(guī)格50rxn/ 10μg/ 200μg
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
ASPC-1:轉(zhuǎn)移胰腺癌細(xì)胞  實(shí)驗(yàn)4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。

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