使用方法:

一、樣品 RNA 的制備

1、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意：可以選用本公司生產的一管式病毒 RNAout

2、或柱式病毒 RNAout。

二：RT（逆轉錄）反應合成 cDNA

1. 按下表配制 RT 反應體系（20 μL 體系）

2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。

3. 嚴格按順序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆轉錄酶（含 RI），

反應終體積為 20μL。

4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應。

5. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用，丌需要純化。

訂購信息：

產品名稱：大豆內源基因Lectin熒光-PCR法

英文名稱：詳見說明
貨號：BJ-01R5063

產品規格：48T/盒

運輸：低溫

保存：負20度

有效期：一年

貨期：現貨

【儲存條件及有效期】:

-20℃避光保存，避免反復凍融，有效期6個月。

【適用儀器】:

ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。

【樣本采集、存放及運輸】：

u 樣本采集：各類型樣本按照常規方法采集；

u 存放：樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應避免反復凍融（多凍融3次）；

u 運輸：采用**或泡沫箱加冰密封進行運輸。

本公司產品僅用于科研。

【自備試劑】:

核酸提取試劑，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒，也可選擇其他合適的核酸提取產品。

組成及試劑配制:

1、 酶標板：一塊（96孔）

2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。

3、 樣品稀釋液：1×20ml。

4、 檢測稀釋液A：1×10ml。

5、 檢測稀釋液B：1×10ml。

實驗注意事項：

1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；

2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；

3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。

4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括量和相對定量）和定性分析。

主要服務：DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。

主要技術：引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

PCR反應的特異性決定因素為：

①引物與模板DNA特異正確的結合；

②堿基配對原則；

③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性；

④靶基因的特異性與保守性。

其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行，結合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區，其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高

PCR產物的**量是以指數方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位)；在學中zui小檢出率為3個。

(3) 簡便、快速

PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應，一般在2～4 小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。

(4) 對標本的純度要求低

不需要分離病毒或及培養細胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發、細胞、活PCR技術概論。

H-D-Phe(2-F)-OH.HCl  1mg  SH5-07  25mg    

GSK1940029 (SCD inhibitor 1)  10mM(in1mLDMSO)  CD1D Human  1μg    

JNJ-39758979  1g  Mexedrone (hydrochloride)  50μg    

GLUL Human, Active  100mg  MIP 4 Human  100mg    

FAM84B Human  0.5mg  STX1A (1-265) Human  5g    

BB-22 6-hydroxyisoquinoline isomer  1mg  AKR1B1 Human  1mg    

5-hydroxy Saxagliptin (hydrochloride)  50mg  TSSC4 Human  25g    

EFNA5 Human  10mg  Sodium 4-amiropparaty Hyalrate  1mg    

CGS 21680  5mg  Bromoenol lactone  1mg    

GCSAM Human  5μg  nor-NOHA (acetate)  1mg    

S-Adenosyl-L-methionine disulfate tosylate  10mg  6-TAMRA (6-Carboxytetramethylrhodamine)  20μg    

Z-Leu-Leu-Arg-AMC  250mg  ATN-224  5g    

Arachidonoyl amide  5mg  1a,1b-dihomo Prostaglandin F2α  1mg    

4-Methylumbelliferyl-N-acetyl-α-D-Neuraminic Acid (sodium salt)  25g  Z-Trp-Val-OH  10mM(in1mLDMSO)    

SB 228357  25mg  10074-G5  0.5mg    

大豆內源基因Lectin熒光-PCR法人糖化血紅蛋白A1c(GHbA1c)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人糖化蛋白(GSP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人糖化白蛋白(GA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人糖蛋白130(gp130)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人糖胺聚糖(GAG)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人碳酸酐酶2(CA-2)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人碳酸酐酶(CA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人炭疽（Anthrax）ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人肽-主要組織相容性復合體復合物(pMHC)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人肽聚糖識別蛋白（PGRP-S）ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

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