使用方法:

一、樣品 RNA 的制備

1、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意：可以選用本公司生產的一管式病毒 RNAout

2、或柱式病毒 RNAout。

二：RT（逆轉錄）反應合成 cDNA

1. 按下表配制 RT 反應體系（20 μL 體系）

2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。

3. 嚴格按順序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆轉錄酶（含 RI），

反應終體積為 20μL。

4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應。

5. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用，丌需要純化。

訂購信息：

產品名稱：禽副粘病毒型PCR實驗試劑

英文名稱：Avian Paramyxovirus 1（APMV）1RTPCR
貨號：BJ-01R3293

產品規格：50T

運輸：低溫

保存：負20度

有效期：一年

貨期：現貨

【儲存條件及有效期】:

-20℃避光保存，避免反復凍融，有效期6個月。

【適用儀器】:

ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。

【樣本采集、存放及運輸】：

u 樣本采集：各類型樣本按照常規方法采集；

u 存放：樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應避免反復凍融（多凍融3次）；

u 運輸：采用**或泡沫箱加冰密封進行運輸。

本公司產品僅用于科研。

【自備試劑】:

核酸提取試劑，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒，也可選擇其他合適的核酸提取產品。

組成及試劑配制:

1、 酶標板：一塊（96孔）

2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。

3、 樣品稀釋液：1×20ml。

4、 檢測稀釋液A：1×10ml。

5、 檢測稀釋液B：1×10ml。

實驗注意事項：

1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；

2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；

3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。

4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括量和相對定量）和定性分析。

主要服務：DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。

主要技術：引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

PCR反應的特異性決定因素為：

①引物與模板DNA特異正確的結合；

②堿基配對原則；

③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性；

④靶基因的特異性與保守性。

其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行，結合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區，其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高

PCR產物的**量是以指數方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位)；在學中zui小檢出率為3個。

(3) 簡便、快速

PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應，一般在2～4 小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。

(4) 對標本的純度要求低

不需要分離病毒或及培養細胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發、細胞、活PCR技術概論。

CeMMEC13  500μg  CAY10578  2μg  Mitochondrial fusion promoter M1  10mM*1mLinDMSO

Radioprotectin-1  1mg  Metergoline  50mg  2-DPMP (hydrochloride)  1mg

UNC2250  10mg  Pico145 (HC-608)  25mg  BBD (NSC240867)  2μg

Levorin Complex  1mg  NOC-5  50mg  ARS-1630  25mg

Ramosetron Hydrochloride  500mg  MHY908  5mg  DL-Norephedrine (hydrochloride)  100g

Cyclo(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Val) TFA  10mM*1mLinDMSO  Pyr10  5mg  Bz-Cit-OMe  10mM*1mLinDMSO

Bactenecin (Bactenecin, bovine)  2μg  APL1β28  10mg  c-Met inhibitor 1  10mg

Brassinin  1mg  ST-836  5mg  BRL 37344, sodium salt  1g

Hydrocortisone acetate (Hydrocortisone 21-acetate)  1g  KL 001  1mg  Fmoc-D-Cys(4-methoxytrityl)-OH  50mg

Amorfrutin B  2.5mg  Olprinone Hydrochloride  10μg  Chlorophyllin sodium copper salt (Chlorophyllin copper sodium complex)  25mg

TK216  5mg  DNAJB8 Human  1mg  Diphenidine (hydrochloride)  1mg

aFGF Bovine  10mg  Fmoc-His(Bzl)-OH  25mg  D159687  20μg

GPP 78  500mg  Super-TDU 1-31  10mg  TAGLN3 Human  1mg

Lipoxin A5  10mg  Siltenzepine  25g  Vinpocetine  50mg

Zacopride hydrochloride  5g  JWH 133  0.5mg  MG-132  10mg

禽副粘病毒型PCR實驗試劑維生素BT 英文名稱對照品 含量：含量測定（HPLC） 20mg/支 pan methyl Lysine  泛甲基賴氨酸抗體規格: 0.2ml

乙水楊胺 英文名稱對照品 含量：含量測定 20mg/支 DAP1  死亡相關蛋白1抗體規格: 0.2ml

枸櫞酸 英文名稱對照品 含量：HPLC法含量測定用 20mg/支 Adenylosuccinate Lyase  腺苷酸琥珀酸裂解酶抗體規格: 0.2ml

順鉑 英文名稱對照品 含量：含量測定（HPLC） 20mg/支 HIPK2  Fas相互作用蛋白激酶2抗體規格: 0.2ml

棓丙酯 英文名稱對照品 含量：含量測定 20mg/支 Glutamine PRPP amidotransferase  谷氨酰胺磷酸核糖基焦磷酸酰胺基轉移酶規格: 0.2ml

氯美扎酮 英文名稱對照品 含量：UV法溶出度檢查 20mg/支 CROT/COT  過氧化物酶體肉堿酰基轉移酶抗體規格: 0.2ml

磷酸氫鈣 英文名稱對照品 含量：UV法含量測定 20mg/支 PAICS  磷酸核糖胺咪唑羧化酶抗體規格: 0.2ml

磺胺二甲嘧啶  英文名稱對照品 含量：HPLC含量測定 20mg/支 p70 S6 kinase alpha  磷酸化核糖體p70 S6蛋白激酶抗體規格: 0.1ml

磺胺脒 英文名稱對照品 含量：HPLC法含量測定 20mg/支 Protamine 2  魚精蛋白2抗體規格: 0.2ml

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