Thermo 反相色譜柱使用和維護(hù)說明

發(fā)布時(shí)間：2018-08-28

1 、適用鍵合相
反相色譜柱鍵合相包括：C18、C8、C4、C1、Phenyl、PFP、aQ、Cyano 1 等。
2 2 、柱體積
色譜柱的柱體積可以通過以下公式估算：
V 為色譜柱柱體積（mL），r 為色譜柱內(nèi)徑（cm），L 為色譜柱長度（cm）。
3 3 、色譜柱柱效測試與保存
反相色譜柱出廠時(shí)都經(jīng)過柱效測試，所用化合物為茶堿、鄰-硝基苯胺、苯甲酸甲酯、
苯乙醚和二甲苯，如有不同，以柱效報(bào)告為準(zhǔn)。
在條件允許情況下，請(qǐng)對(duì)新色譜柱進(jìn)行柱效測試。
反相色譜柱出廠時(shí)均保存在乙腈-水溶液中。
4 4 、溫度
所有硅膠基質(zhì)色譜柱使用溫度應(yīng)低于 60℃。
5 5 、樣品
* 好將樣品溶解在流動(dòng)相或極性相近的溶劑中。如果使用梯度洗脫，則需要將樣品溶解
在初始流動(dòng)相或極性相近的溶劑中。
樣品溶液不應(yīng)含有任何顆粒物，* 好使用 0.5μm 或更小粒徑的濾膜過濾。同時(shí)建議在
色譜系統(tǒng)中使用在線過濾器。
樣品溶液如果使用強(qiáng)溶劑（例如，流動(dòng)相為水，樣品溶劑為甲醇），為達(dá)到較好峰形，
需要降低進(jìn)樣量（以 250x4.6mm 規(guī)格為例，小于 10μL）。
6 6 、流動(dòng)相
所有流動(dòng)相，特別是含有緩沖鹽的流動(dòng)相，* 好當(dāng)日實(shí)驗(yàn)當(dāng)日配制；如果使用了前日配
制的流動(dòng)相，請(qǐng)確保流動(dòng)相 pH 值沒有變化，并確保流動(dòng)相沒有長菌。
流動(dòng)相的 pH 值取決于您的應(yīng)用和色譜柱填料類型。我們建議在所有的色譜柱上都僅使
用 pH 范圍為 2~8 的流動(dòng)相（ Hypercarb 可以使用 pH 為 1~14 的流動(dòng)相）；如果需要使用
pH 更高（2~10）的流動(dòng)相，請(qǐng)選用 Hypersil GOLD、Syncronis C18、Betasil C18 等色譜柱，
并請(qǐng)盡量避免使用無機(jī)緩沖鹽。
請(qǐng)盡量避免在常規(guī)流動(dòng)相中使用很高比例的水（>95%）作為流動(dòng)相，此類流動(dòng)相僅適
用于中等疏水的鍵合相，例如 Hypersil GOLD aQ、Aquasil C18、Syncronis aQ 等色譜柱。
所有流動(dòng)相都需使用 2μm 濾膜過濾。
7 7 、色譜柱安裝
請(qǐng)小心操作色譜柱。
不要摔、碰色譜柱，這樣會(huì)損壞色譜柱床，使色譜柱性能下降。
使用合適的連接管路和接頭，確保色譜柱連接處死體積降到* 低（使用不銹鋼接頭時(shí)需
要尤其注意）。我們建議使用 SLIPFREE 接頭，此接頭與 Thermo 色譜柱以及其他品牌色譜
柱均完美匹配。
8 8 、色譜柱平衡
在進(jìn)行分析之前，請(qǐng)使用至少 20 倍柱體積的流動(dòng)相沖洗色譜柱，以使色譜柱達(dá)到平衡。
9 9 、色譜柱保護(hù)
對(duì)于“臟”的樣品以及組分未知的樣品，請(qǐng)盡量使用在線濾器或保護(hù)柱，如果可能，使
用 SPE 小柱對(duì)樣品進(jìn)行前處理是更好的選擇。上述做法可以有效延長色譜柱使用壽命。
10 、色譜柱清洗
常規(guī)清洗：
在儲(chǔ)存色譜柱之前，請(qǐng)使用至少 20 倍柱體積的不帶緩沖鹽的流動(dòng)相沖洗色譜柱（去除
緩沖鹽），再用更強(qiáng)的溶劑沖洗色譜柱（去除強(qiáng)保留成分，反相色譜通常使用甲醇或乙腈），
然后使用合適的溶劑儲(chǔ)存色譜柱。
清洗強(qiáng)保留污染物：
使用如下試劑依次清洗色譜柱
20 倍柱體積不帶緩沖鹽的流動(dòng)相；
20 倍柱體積甲醇或乙腈；
20 倍柱體積異丙醇；
20 倍柱體積正己烷或氯仿；
20 倍柱體積異丙醇；
20 倍柱體積甲醇或乙腈。
11 、色譜柱保存
反相色譜柱，保存溶劑通常是含至少 30% 有機(jī)相的水溶液，也可在常規(guī)清洗后直接保
存在有機(jī)相中。
如果需要長時(shí)間儲(chǔ)藏，則需要使用較高比例的有機(jī)相（有機(jī)相比例至少大于 50%，但
不建議使用純有機(jī)相）。
注意：如果違反上述規(guī)程，可能使色譜柱失去保修。

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