上海豫明品牌的FYY系列分子雜交儀采用微電腦智能控制,液晶顯示三種功能:溫度顯示、瓶架旋轉速度、托盤擺動速度。具有存儲記憶功能,可以直觀顯示系統的運行狀況。溫度控制采用數字PID技術,輸出采用PWM方式,控溫精度高,穩定性好,并設有超溫保護裝置。該儀器可以同時直觀箱內控溫溫度,滾動式瓶架旋轉速度,酶標板或試劑 托盤的擺動速度。同時任意選擇您所需要的控溫溫度,瓶架旋轉速度,搖床擺動速度。
分子雜交基本原理:
豫明分子雜交指具有一定同源序列的兩條核酸單鏈(DNA或RNA),在一定條件下按堿基互補配對原則經過退火處理,形成異質雙鏈的過程。通過此原理,就可以使用已知序列的單鏈核酸片段作為探針,去查找各種不同來源的基因組DNA分子中的同源基因或同源序列。
復性:變性DNA只要消除變性條件,二條互補鏈還可以重新結合,恢復原來的雙螺旋結構,整個過程稱為復性。
退火:通常DNA熱變性后,將溫度緩慢冷卻,并維持在比Tm低25~30℃左右時,變性后的單鏈DNA即可恢復雙螺旋結構,這一過程又叫做退火。
復性后的DNA,理化性質都能得到恢復。倘若DNA熱變后快速冷卻,則不能復性。
影響復性速度的因素:
1、DNA的濃度愈高,復性速度也愈快。
2、DNA片段的大?。篋NA片段愈大,擴散速度愈低,使DNA片段線狀單鏈互相發現互補的機會減少。因此,在復性實驗中,必要時將DNA切成小片段,再進行復性。
3、溫度過高不利于復性。
4、溶液的離子強度:通常鹽濃度較高時,復性速度較快。
5、DNA順序的復雜性;簡單的分子復性很快,如polyd[T]和polyd[A]由于彼此互補識別很快,故能迅速復性。但順序較復雜的DNA分子復性則較慢。因此通過變性速率的研究,可以了解DNA順序的復雜性。
DNA變性:DNA變性是指雙螺旋之間氫鍵斷裂,雙螺旋解開,形成單鏈無規則線團,因而發生性質改變(如粘度下降,沉降速度增加,浮力上升,紫外吸收增加等) 。
1.DNA變性的方法:加熱;改變DNA溶液的pH;有機溶劑(如乙醇、尿素、甲酰胺及丙酰胺等)等理化因素。
2、增色效應:DNA在260nm處有*大吸收值,由于含有堿基的緣故。在DNA雙螺旋結構模型中堿基藏于內側,變性時由于雙螺旋解開,于是堿基外露,260nm紫外吸收值因而增加,該現象稱為增色效應。利用DNA變性后波長260nm處紫外吸收的變化可追蹤變性過程。
3、溶解曲線:升高溫度使DNA變性,以溫度對紫外吸收作圖,可得到一條曲線,稱為溶解曲線。
4、融解溫度:通常人們把50%DNA分子發生變性的溫度稱為變性溫度(熔解曲線中點對應的溫度),由于這一現象和結晶的融解相類似,故又稱融點或融解溫度。因此Tm是指消光值上升到*大消光值一半時的溫度。
5、影響Tm值的因素:Tm不是一個固定的數值,它與很多因素有關: pH、離子強度。隨著溶劑內離子強度上升,Tm值也隨著增大。 DNA的堿基比例、DNA的均一性 ;在相同條件下,DNA內G-C配對含量高,其Tm值也高。
6、DNA中的GC含量與Tm值關系:
Tm = 69。3+0。41 × % (G+C)
對于小于20bp的寡核苷酸,Tm=4(G+C)+2(A+T)
實驗表明DNA分子中(G+C)克分子含量百分比的大小與Tm值的高低呈直線關系。