什么是CRISPR?
CRISPR（Clustered regularly interspaced short palindromic repeats）, 是**中用于與病毒進(jìn)行斗爭(zhēng)的**武器。 生命進(jìn)化歷史上，**為了將病毒的外來(lái)入侵基因**，進(jìn)化出CRISPR系統(tǒng)，利用這個(gè)系統(tǒng)，**可以不動(dòng)聲色地把病毒基因從自己的染色體上切除，這是**特有的**系統(tǒng)。這種切除功能其中比較典型的模式是依靠一個(gè)復(fù)合物，該復(fù)合物能在一段RNA指導(dǎo)下，定向?qū)ふ夷繕?biāo)DNA序列（圖1），并招募一個(gè)蛋白（如Cas9）（圖2）,Cas9能夠?qū)⒃撔蛄羞M(jìn)行切除（圖3）。正是基于**的這種后天**防御機(jī)制，CRISPR/Cas9技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生，從而使科學(xué)家們利用RNA引導(dǎo)Cas9核酸酶實(shí)現(xiàn)對(duì)多種細(xì)胞基因組的特定位點(diǎn)（如 NHEJ非同源性末端接合) (圖四4)進(jìn)行修飾。
為什么要電轉(zhuǎn)？
CRISPR**已經(jīng)開(kāi)始，將CRISPR結(jié)構(gòu)導(dǎo)入特定細(xì)胞 (如干細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、造血細(xì)胞、受精卵,等等)用普通地方法旺旺很困難。電穿孔技術(shù)可使這些細(xì)胞在**的電脈沖作用下，在細(xì)胞膜上形成瞬時(shí)的空隙，從而誘導(dǎo)CRISPR結(jié)構(gòu)通過(guò)這些空隙進(jìn)入細(xì)胞中。在電脈沖撤離后，細(xì)胞恢復(fù)原有狀態(tài)，這種物理學(xué)的方式并不影響細(xì)胞內(nèi)部任何代謝及生理變化。
BTX電轉(zhuǎn)和CRISPR
外源物質(zhì)如何高效的進(jìn)入目的細(xì)胞是進(jìn)行表達(dá)修飾實(shí)驗(yàn)（CRISPR、基因編輯、基因工程）成功的關(guān)鍵。BTX電穿孔系統(tǒng)由于它的易用性、重復(fù)性、高效率和低毒性，已經(jīng)成為將CRISPR結(jié)構(gòu)導(dǎo)入細(xì)胞（如哺乳動(dòng)物細(xì)胞、**、酵母、植物、寄生蟲(chóng)等）的重要手段。
使用BTX系統(tǒng)進(jìn)行多種類型轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)--貼壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞及原代細(xì)胞·在體·在卵內(nèi)·在**內(nèi)·離體
使用BTX系統(tǒng)可轉(zhuǎn)染CRISPR到多種細(xì)胞，包括很多難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞
神經(jīng)細(xì)胞 ? 原代細(xì)胞 ? **細(xì)胞 ? 胚胎細(xì)胞 ? 受精卵 ? 寄生細(xì)胞
Why BTX?
使用新的卵母細(xì)胞電極進(jìn)行卵母細(xì)胞/胚胎電轉(zhuǎn)
卵母細(xì)胞電極:
?可用于高通量小鼠卵母細(xì)胞、受精卵或者胚胎的CRISPR/Cas9基因編輯
?易于使用，快速，高通量
?每次可以操作20 – 40 個(gè)卵母細(xì)胞
?電轉(zhuǎn)過(guò)程可視
?容易收集電轉(zhuǎn)后所有的胚胎細(xì)胞
使用BTX電轉(zhuǎn)儀將 CRISPR/Cas9 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染進(jìn)難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞例如Taxoplasma gondii
A) 在Taxoplasma gondii 細(xì)胞中，CRISPR 質(zhì)粒 (pU6-SAG1)切斷SAG1 位點(diǎn)
B) 成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞 (綠色) 與 模擬（mock） 轉(zhuǎn)染細(xì)胞比較
來(lái)源: Efficient Genome Engineering of Toxoplasma gondii using CRISPR/Cas9 Sidik SM, et al., 2014Plos One, volume 9, Issue 6, July 2014
