熒光原位雜交技術(shù)（FISH）常見問答
對于FISH操作來說，那些因素比較重要？
在FISH中*重要的因素是溫度、光照、濕度和各種試劑的PH值。溫度和濕度直接影響著探針和目標DNA的雜交效率；光照影響了熒光染料的強度；各種試劑pH是否符合要求直接關(guān)系到FISH的穩(wěn)定性。
在夏季成功檢測的同一探針和樣本為什么在冬季就得不到理想的效果？
發(fā)生上述現(xiàn)象*大的可能是FISH操作的環(huán)境溫度發(fā)生了變化導致的。在我國，冬季普遍比夏季寒冷，低的環(huán)境溫度使FISH得不到良好的雜交效率。此外，探針的保存不當也容易引起熒光素的萃滅而導致效果不佳。因此保證FISH操作中的溫度非常重要。
該如何保證FISH操作中的溫度？
*佳的措施是使用一些FISH的專用儀器進行操作，諸如Vysis的Hybrit FISH雜交儀。如果是手工操作，首先要對FISH操作過程中可能使用的一些儀器進行溫控能力的檢查，諸如水浴鍋、孵箱，對其中不符合要求的要進行更換（**診斷中的探針要求溫控精度在1度以內(nèi)）。其次，要盡可能地保持操作環(huán)境溫度在20度以上，對于在冬季進行的FISH操作尤為重要。此外對于需要預熱以達到要求溫度的試劑，在使用前必須使用溫度計對其進行測溫。同時檢測的樣本*好不能超過4塊。操作中的行動一定要迅速。操作者還往往忽視一些小部件的溫度，諸如載玻片和蓋玻片。特別是在冬季，蓋玻片本身溫度就低，加之探針的量本就不多（10ul），因此事先沒有預熱的蓋玻片會使得雜交液的溫度急劇下降嚴重地影響了探針和目標DNA的雜交效率。因此對上述小部件的預熱也能有效地提高FISH的雜交效果。
使用熒光顯微鏡觀察結(jié)果時，*初有清晰而明亮的信號。但隨后信號急劇衰減。幾分鐘后信號就消失了。這是探針本身的質(zhì)量問題嗎？
在正常情況下，目前的商業(yè)化探針即使是雜交后，如果保存適當，熒光信號能保持半年以上。出現(xiàn)上述情況主要的原因是操作觀察的過程中或是探針的保存過程中沒有采取嚴格的避光措施。陽光或是強的燈光都會使熒光染料發(fā)生急劇的淬滅，從而造成了觀察結(jié)果的不穩(wěn)定。因此在操作和觀察時，盡可能在暗室中操作。也可以在封片觀察時加入一定的antifade（抗淬滅劑）以延緩熒光素的淬滅。
如何配制各種試劑呢？
強烈建議使用去離子水配制各種所需的試劑。此外，配制后使用pH計檢測是否符合要求。配制的各種試劑都要采用超純級的要求。每次FISH使用新的試劑，舊的試劑*好棄置不用。洗脫液和變性液當天用當天配。
直標型探針和間標型探針有何不同？為什么我們要選擇直標型探針？
所謂的直標型探針是指DNA探針共價連接著熒光素基團；間標型探針則是指DNA探針先與某個半抗原連接，諸如生物素或地高辛，然后半抗原與熒光素基團連接從而形成探針－半抗原－熒光素基團，類似“三明治”的復合物。與間標型探針相比，直標型探針具有低背景、高特異性的特點。隨著熒光染料和熒光檢測技術(shù)的不斷發(fā)展，直標型探針的靈敏度也不斷提高。因而在FISH檢測領(lǐng)域，尤其是在**分型領(lǐng)域，探針大多采用直標型設(shè)計。
能對同一樣本進行多次的FISH操作嗎？
在多數(shù)情況下，如果FISH操作沒有得到正常的結(jié)果，我們可以將探針洗去，然后使用同樣的探針進行再次的雜交。如果我們使用的是直標型探針，還可以使用不同探針對同一樣本進行反復雜交。針對不同的樣本，處理方法略有不同。
外周血樣本的處理：
1、使用鑷子小心地揭去雜交區(qū)的蓋玻片
2、將樣本片浸泡于70％、85％和100％的乙醇中各一分鐘以便充分地脫水。將片子風干后就可以進行重復的雜交了。二次雜交中建議將變性的時間縮短一半，但不得少于3分鐘。如果對同一樣本還要進行三次雜交，變性的時間就無需減少了。
對于多次雜交，復染液濃度的降低有利于保持探針的亮度。曾有報道在同一樣本片上進行了多達8次的FISH操作。
以上是熒光原位雜交技術(shù)（FISH）常見問答，此外，我公司還專業(yè)生產(chǎn)數(shù)顯恒溫振蕩器，大型搖床，石英亞沸高純水蒸餾器，臺式電動離心機，可調(diào)高速勻漿機，磁力攪拌器，氮吹儀，采樣器等多種儀器。如果您對我們的產(chǎn)品有任何疑問的話，歡迎聯(lián)系我們。
電話
QQ：
公司網(wǎng)址 www.zhongzheng17.com
我們將竭誠為您服務
金壇市中正儀器制造有限公司