我國中藥材資源豐富,藥用動(dòng)植物達(dá)1 萬余種[ 1 ] ,藥材來源復(fù)雜,品種劃分混亂。許多藥材外形類似,加工后容易改變形態(tài)結(jié)構(gòu),傳統(tǒng)的中藥鑒定手段難以準(zhǔn)確鑒別。在中藥材市場(chǎng)上,以次充好、以假亂真現(xiàn)象嚴(yán)重。保證藥材純正面臨著巨大的挑戰(zhàn),中藥材品質(zhì)鑒定已成為中藥質(zhì)量控制的首要環(huán)節(jié)。近年來,不少新的技術(shù)方法被用于這一領(lǐng)域,其中以DNA 指紋技術(shù)、DNA 測(cè)序技術(shù)為代表的DNA 分子標(biāo)記技術(shù)以其準(zhǔn)確性高、重現(xiàn)性好等特點(diǎn)尤為引人矚目。現(xiàn)就其應(yīng)用狀況綜述如下。
1 DNA 指紋圖譜技術(shù)
1. 1 限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性( restriction fragment lengthpolymorphism, RFLP) 和擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性( amplif iedfragment length polymorphism, AFLP) 技術(shù)RFL P 技術(shù)出現(xiàn)較早,在該領(lǐng)域應(yīng)用也較早。1997 年,Cheng 等[ 2 ] 采用PCR - RFL P 結(jié)合PCR 選擇性限制酶譜(PCR - selective restriction , PCR - SR) 分析白術(shù)、茅蒼術(shù)和關(guān)蒼術(shù)核基因組rDNA ITS1 ( internal transcribed spacer ,ITS) 圖譜,較易檢定三者藥材基原。1999 年,Ngan[ 3 ] 等采用PCR - RFL P 方法考察了5. 8S rDNA ITS 區(qū),成功區(qū)分出人參屬6 種植物及其2 種易混偽品。AFL P 技術(shù)在這方面也有應(yīng)用。2000 年,馬小軍等[ 4 ]對(duì)大馬牙、二馬牙等5 個(gè)人參農(nóng)家類型的AFL P 圖譜進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)所有類型均有特異條帶可作為鑒別特征。同年,羅志勇等[ 5 ]運(yùn)用這一技術(shù),成功地構(gòu)建出高質(zhì)量的人參、西洋參AFL P 圖譜,發(fā)現(xiàn)北美西
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