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培養方法

傳代方法 將舊培養液吸除，PBS清洗兩遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在顯微鏡下觀察，期間禁止搖晃培養皿，細胞剛有脫落時，則吸除大部分胰酶，留約0.5mL，移至培養箱消化，約2min取出。傳代用12mL CM1-1培養液終止消化，輕輕吹打均勻細胞，后可分3~6皿培養；

生長條件 37℃，5%CO2，CM1-1培養液。CM1-1培養液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM高糖培養液，含谷氨酰胺，含丙酮酸鈉。

存儲條件 凍存則用6mL凍存液（90%FBS+10%DMSO）終止消化，吹打均勻，分為6支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存，過夜轉移至液氮中保存。

培養操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）； 

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時； 

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片完全浸在培養液中； 

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及細胞化學檢測。 

實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法； 

2．所使用的蓋玻片應該為玻璃**，并經過鉻酸洗液處理； 

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕； 

4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率； 

5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

細胞培養方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

英文名稱  Anti-phospho-PIK3R2(Tyr467)

中文名稱  磷酸化磷脂酰肌醇激酶p85β抗體

別    名  PIK3R2(phospho Y467); p85 antibody p85 beta; p85-BETA; P85B; P85B_HUMAN; Phosphatidylinositol 3 kinase; Phosphatidylinositol 3 kinase regulatory beta subunit; Phosphatidylinositol 3 kinase regulatory subunit beta; Phosphatidylinositol 3 kinase regulatory subunit polypeptide 2; Phosphatidylinositol 3-kinase 85 kDa regulatory subunit beta; phosphatidylinositol 3-kinase; Phosphatidylinositol 3-kinase regulatory beta subunit; Phosphatidylinositol 3-kinase regulatory subunit beta; Phosphoinositide 3 kinase regulatory subunit 2 (beta); Phosphoinositide 3 kinase regulatory subunit 2; Phosphoinositide 3 kinase regulatory subunit polypeptide 2 (p85 beta); Phosphoinositide 3 kinase regulatory subunit polypeptide 2; Phosphoinositide 3 kinase, regulatory subunit 2 (beta); PI3 kinase p85 beta subunit; PI3 kinase p85 subunit beta; PI3-kinase regulatory subunit beta; PI3-kinase subunit p85-beta; PI3K; PI3K regulatory subunit beta; PIK3R 2; PIK3R2; polypeptide 2 (p85 beta); PtdIns 3 kinase p85 beta; PtdIns-3-kinase p85-beta; PtdIns-3-kinase regulatory subunit beta; PtdIns-3-kinase regulatory subunit p85-beta.

濃    度  1mg/1ml

規 格  0.1ml/100μg

抗體來源  Rabbit  

克隆類型  polyclonal

交叉反應  Human, Mouse, Rat, Dog, Cow, Horse, Rabbit

產品類型  一抗  磷酸化抗體   

研究領域  學 信號轉導 激酶和磷酸酶  

蛋白分子量  predicted molecular weight: 82kDa

性    狀  Lyophilized or Liquid

免 疫 原  KLH conjugated Synthesised phosphopeptide derived from human PIK3R2 around the phosphorylation site of Tyr467

亞    型  IgG

純化方法  affinity purified by Protein A

儲 存 液  0.01M PBS, pH 7.4 with 10 mg/ml BSA and 0.1% Sodium azide

產品應用   WB=1:100-500  ELISA=1:500-1000  IP=1:20-100  IHC-P=1:100-500  IHC-F=1:100-500  IF=1:100-500

（石蠟切片需做抗原修復）
胸腺基質細胞胰島素受體底物2磷酸化檢測試劑盒D-半胱氨酸鹽酸鹽一水物 98%異佛手柑內酯 分析標準品，≥98%

叉頭框蛋白O磷酸化檢測試劑盒DL-半胱氨酸 97%異古倫賓 分析標準品，≥98%

胰島素受體磷酸化檢測試劑盒D-谷氨酸 98%異葒草素 分析標準品，≥98%

煙堿型乙酰膽堿受體檢測試劑盒L-高精氨酸鹽酸鹽 98%異麥角甾苷 分析標準品，≥98%

艱難梭菌素B檢測試劑盒L-高絲氨酸 98%異鼠李素-3-O-新橙皮糖苷 分析標準品，≥98%

PAD-3 Ab檢測試劑盒D-組氨酸 99%異水飛薊賓 分析標準品，≥98%

抗氨甲酰化蛋白抗體檢測試劑盒L-高苯氨酸 98%酸棗仁皂苷 A 分析標準品，≥98%