培養方法

傳代方法 將舊培養液吸除，PBS清洗兩遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在顯微鏡下觀察，期間禁止搖晃培養皿，細胞剛有脫落時，則吸除大部分胰酶，留約0.5mL，移至培養箱消化，約2min取出。傳代用12mL CM1-1培養液終止消化，輕輕吹打均勻細胞，后可分3~6皿培養；

生長條件 37℃，5%CO2，CM1-1培養液。CM1-1培養液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM高糖培養液，含谷氨酰胺，含丙酮酸鈉。

存儲條件 凍存則用6mL凍存液（90%FBS+10%DMSO）終止消化，吹打均勻，分為6支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存，過夜轉移至液氮中保存。

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培養操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）； 

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時； 

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片完全浸在培養液中； 

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及細胞化學檢測。 

細胞培養方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

Post-translational modifications : Gamma-carboxyglutamate residues are formed by vitamin K dependent carboxylation. These residues are essential for the binding of calcium.

Similarity : Belongs to the osteocalcin/matrix Gla protein family.

Contains 1 Gla (gamma-carboxy-glutamate) domain.

Database links : UniProtKB/Swiss-Prot: P02818.2

骨鈣素又稱骨γ-羧谷氨酸包含蛋白

英文名稱  Anti-OLFM3/Optimedin

中文名稱  嗅球蛋白3抗體

別    名  Noe3; NOE3_HUMAN; Noelin 3; Noelin-3; NOELIN3; NOELIN3 V1; NOELIN3 V2; NOELIN3 V3; NOELIN3 V4; NOELIN3 V5; NOELIN3 V6; Olfactomedin 3; Olfactomedin related ER localized protein 3; Olfactomedin-3; Olfactomedin3; Olfm3; Optimedin.

濃    度  1mg/1ml

規 格  0.2ml/200μg

抗體來源  Rabbit  

克隆類型  polyclonal

交叉反應  Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Sheep

產品類型  一抗    

研究領域  神經生物學 信號轉導 細胞骨架 細胞外基質  

蛋白分子量  predicted molecular weight: 52kDa

性    狀  Lyophilized or Liquid

免 疫 原  KLH conjugated synthetic peptide derived from human OLFM3/Optimedin
小鼠胚胎干細胞過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活子1α檢測試劑盒山梨酸 99.8%聚苯乙烯(PS) 通用型I，一般射出成型用

過氧化脂質;乳過氧化物酶檢測試劑盒L-氨酸甲酯鹽酸鹽 98%聚苯乙烯(PS) 通用型II,高強度

還原型谷胱甘肽檢測試劑盒L-精氨酸乙酯 98%聚苯乙烯(PS) 通用型III,高強度、押出用、食品用

含Ⅲ型纖連蛋白域蛋白5檢測試劑盒L-氨酸芐酯對甲苯磺酸鹽 98%聚苯乙烯(PS) 耐沖擊型

含IQ基元GTP酶激活蛋白1檢測試劑盒L-天冬氨酸-β-芐酯 98%聚苯乙烯(PS) 高光澤度級

和肽素檢測試劑盒Boc-L-谷氨酰 98%聚苯乙烯(PS) 擠出級

核苷酸還原酶M1檢測試劑盒BOC-L-絲氨酸 97%聚苯乙烯(PS) 食品級

實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法； 

2．所使用的蓋玻片應該為玻璃**，并經過鉻酸洗液處理； 

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕； 

4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率； 

5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。