培養(yǎng)方法

傳代方法 將舊培養(yǎng)液吸除，PBS清洗兩遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在顯微鏡下觀察，期間禁止搖晃培養(yǎng)皿，細(xì)胞剛有脫落時，則吸除大部分胰酶，留約0.5mL，移至培養(yǎng)箱消化，約2min取出。傳代用12mL CM1-1培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打均勻細(xì)胞，后可分3~6皿培養(yǎng)；

生長條件 37℃，5%CO2，CM1-1培養(yǎng)液。CM1-1培養(yǎng)液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM高糖培養(yǎng)液，含谷氨酰胺，含丙酮酸鈉。

存儲條件 凍存則用6mL凍存液（90%FBS+10%DMSO）終止消化，吹打均勻，分為6支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存，過夜轉(zhuǎn)移至液氮中保存。

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培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）； 

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時； 

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中； 

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及細(xì)胞化學(xué)檢測。 

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

產(chǎn)品介紹 Ras p21 can exist in either a physiologically quiescent GDP-binding state or a GTP-binding signal-emitting state (1,2). Interaction of Ras p21 with GTPase activating protein (GAP) can increase the rate of hydrolysis of Ras p21-bound GTP by as much as 1000-fold (3). In mitogenically activated and tyrosine kinase-transformed cells, Ras GAP forms a complex with a protein designated p190 (4). At its amino terminus, p190 contains sequence motifs characteristic of all known GTPases, whereas the carboxy terminus contains sequences similar to those found in the Bcr gene product, n-chimerin and Rho GAP, all of which exhibit intrinsic GAP activity (4,5). Oligophrenein-1 is an additional protein with GTPase activating activity. Oligophrenein-1 is a RhoGAP protein that stimulates GTP hydrolysis of Rho subfamily members and is involved in cell migration, morphogenesis and axon outgrowth (6).

Function : Stimulates GTP hydrolysis of members of the Rho family. Could activates GTPase targets that are known to affect cell migration and outgrowth of axons and dendrites.

Subunit : Interacts with HOMER1. Interacts with AMPA receptor complexes. Interacts with SH3GL2 (endophilin-A1)

Subcellular Location : Cell junction, synapse. Cell projection, axon. Cell projection, dendritic spine. Note=Present in both presynaptic and postsynaptic sites

Tissue Specificity : Expressed in brain.

DISEASE : Defects in OPHN1 are the cause of mental retardation X-linked OPHN1-related (MRXSO) [MIM:300486]; formerly designated MRX60. MRXSO is a syndromic mental retardation. Patients present mental retardation associated with cerebellar hypoplasia and distinctive facial dysmorphism.

Similarity : Contains 1 PH domain.

Contains 1 Rho-GAP domain.

Database links : UniProtKB/Swiss-Prot: O60890.1

英文名稱  Anti-Orexin Prepro

中文名稱  食欲素前體蛋白OX抗體

別    名  HCRT; Hypocretin; OX; PPORX; PPOX; Prepro orexin; OREX_HUMAN; Orexin; Hcrt; Hypocretin-1; Hcrt1; Orexin-B; Hypocretin-2; Hcrt2.

濃    度  1mg/1ml

規(guī) 格  0.2ml/200μg

抗體來源  Rabbit  

克隆類型  polyclonal

交叉反應(yīng)  Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Rabbit, Sheep

產(chǎn)品類型  一抗    
小鼠表皮干細(xì)胞成熟BNP檢測試劑盒α-氧代-2-呋喃乙酸 97%人參皂甙 Re 分析標(biāo)準(zhǔn)品，>98%

成熟促進(jìn)因子檢測試劑盒奧美拉唑人參皂苷Rh1 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%

成纖維活化蛋白檢測試劑盒對羥基聯(lián)苯 分析標(biāo)準(zhǔn)品,用于環(huán)境分析人參皂苷Rf 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%

成纖維生長因子檢測試劑盒棕櫚酸棕櫚酯 98%人參皂苷Rb3 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%

成纖維生長因子10檢測試劑盒棕櫚酸棕櫚酯 95%異酸正丁酯 98%

成纖維生長因子19檢測試劑盒藍(lán)五號鈉鹽 80%乙酸異烯酯 99%

成纖維生長因子21檢測試劑盒聚（甲基乙烯基共聚馬來酸） Mw ~216,000 to ~80,000, powder印刷膠帶,用于封裝紙箱,60m*60mm*0.057mm

實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法； 

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為玻璃**，并經(jīng)過鉻酸洗液處理； 

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕； 

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率； 

5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。