溶血對ELISA檢測結果的影響主要體現在以下幾個方面:
一、假陽性干擾?
?血紅蛋白的HRP樣活性?:紅細胞中的血紅蛋白具有類似辣根過氧化物酶(HRP)的活性,在HRP標記的ELISA中會催化底物(如TMB)非特異性顯色,導致OD值假性升高。
?典型表現?:重度溶血樣本(Hb>5g/L)可使乙肝表面抗原(HBsAg)或HIV抗體檢測的假陽性率顯著增加。
二、?樣本基質破壞?
?蛋白降解?:溶血釋放的蛋白酶(如胰島素降解酶)會降解目標抗原(如胰島素、肌鈣蛋白),導致檢測值假性降低。
?稀釋效應?:紅細胞破裂釋放細胞內液,稀釋血清中目標物濃度,可能造成低濃度樣本漏檢。
三、?**檢測特異性下降?
?非特異性結合?:溶血后釋放的磷脂和細胞膜碎片可能吸附抗體,增加背景信號。
?ELISA方法差異?:一步法(樣本與酶標抗體同時加入)比兩步法更易受溶血干擾。
為了減少溶血對ELISA結果的影響,應采取以下措施:
1、正確采血:確保采血過程中針頭準確進入血管,避免抽血時間過長,減少血腫和泡沫的形成。
2、避免劇烈搖晃:樣本在運輸和處理過程中應避免劇烈搖晃,以防紅細胞破裂。
3、及時處理:采血后應盡快分離血清或血漿,避免長時間放置導致溶血。
4、使用抗凝劑:根據實驗需求選擇合適的抗凝劑,注意某些抗凝劑可能對ELISA有干擾。
5、樣本保存:凍存樣本時避免反復凍融,以減少蛋白的變性和降解。
通過這些方法,可以有效減少溶血對ELISA實驗結果的影響,確保實驗數據的準確性和可靠性。