細胞復蘇的基本原則:
從液氮或80°C冰箱中取出冷凍的細胞樣本,立即放入37°C水浴中,輕輕搖動以實現快速解凍。此過程應控制在1分鐘內完成,以減少冰晶對細胞的損傷。
2、轉移至培養基
解凍后,迅速將細胞轉移到含有預熱至37°C的完全培養基的離心管中。完全培養基應含有必要的營養成分、生長因子和抗生 素。
3、離心和重懸
將細胞懸液在10001500 rpm下離心5分鐘,以去除冷凍保護劑。小心吸去上清液,加入適量的新鮮培養基重懸細胞。
細胞復蘇后的狀態評估
細胞復蘇后,不能直接開始實驗,需要先評估細胞狀態,確保細胞恢復到正常生長狀態。
1、細胞形態
使用顯微鏡觀察細胞的形態,健康的細胞應具有典型的形態特征。比如,貼壁細胞應該貼壁良好,細胞形態完整;懸浮細胞應該形態規則,沒有明顯的碎片。
2、細胞活力
通過臺盼藍排斥試驗或MTT試驗等方法測定細胞活力。細胞活力應高于90%,這通常通過臺盼藍排斥試驗來評估。
3、生長速率
監測細胞生長曲線,評估細胞增殖速度是否恢復正常。細胞生長速率穩定,沒有下降的趨勢,才說明細胞狀態良好。