一抗操作步驟:
一抗的操作步驟主要包括封閉、?一抗孵育和洗滌。?
封閉:?這一步驟的目的是為了防止非特異性的蛋白質結合位點與抗體結合,?從而引起非特異的染色和背景。?通常使用惰性蛋白質或非離子去污劑來封閉膜上的未結合位點,?以降低抗體的非特異性結合。?常用的封閉試劑有5%的BSA或脫脂奶粉,?緩沖液一般選擇PBST或TBST。?封閉條件通常為室溫或37℃緩慢搖動1~2小時,?特殊情況也可4℃過夜。?封閉完成后需要進行洗膜,?以去除膜上未結合的封閉試劑。?
一抗孵育:?在一抗孵育之前,?需要參考一抗的說明書,?按照適當比例用封閉液稀釋一抗。?吸盡封閉液后,?立即加入稀釋好的一抗,?室溫或4℃在搖床上緩慢搖動孵育1~2小時。?如果一抗孵育一小時效果不佳,?可以在4℃緩慢搖動孵育過夜。?然后回收一抗,?加入Western洗滌液,?在搖床上緩慢搖動洗滌5-10分鐘,?共洗滌3次。?如果結果背景較高,?可以適當延長洗滌時間并增加洗滌次數。?
洗滌:?洗滌的目的是為了洗去一抗的非特異性結合,?洗滌的效果直接影響結果背景的深淺。?建議使用PBST或TBST作為洗滌液,?其中的Tween20有助于去除非特異性的結合,?減少背景。?洗滌的次數和時間根據具體實驗來確定,?建議清洗3-5次,?每次5分鐘。
磷酸化蛋白激酶A受體2α亞基抗體
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貨號
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規格
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價格
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用途
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BJ012112
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50ul
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1380
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僅供科研實驗
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BJ012112
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100ul
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2380
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僅供科研實驗
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BJ012112
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200ul
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3480
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僅供科研實驗
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商品屬性:
英文名稱:phospho-PRKAR2A (Ser99)
中文名稱:磷酸化蛋白激酶A受體2α亞基抗體
別 名;PKA R2 (phospho-Ser96); phospho-PKA R2
(Ser96); phospho-PKA R2 (Ser99); PKA R2; KAP2; KAP2_HUMAN; MGC3606; PKR 2;
PKR2; PRKA R2; PRKAR 2; PRKAR2; Protein kinase A RII alpha subunit; Protein
kinase cAMP dependent regulatory type II alpha; cAMP dependent protein kinase
regulatory subunit alpha 2; cAMP dependent protein kinase regulatory subunit
RII alpha; cAMP dependent protein kinase type II alpha regulatory chain; cAMP
dependent protein kinase type II alpha regulatory subunit; cAMP-dependent
protein kinase type II-alpha regulatory subunit;
產品類型;磷酸化抗體
研究領域; 細胞生物 轉錄調節因子
抗體來源;Rabbit
克隆類型;Polyclonal
交叉反應;Human, (predicted: Mouse, Rat, )
產品應用;WB=1:500-2000
ELISA=1:5000-10000 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:100-500 (石蠟切片需做抗原修復)
not yet tested in
other applications.
optimal
dilutions/concentrations should be determined by the end user.
理論分子量;45kDa
細胞定位;細胞漿 細胞膜
性 狀;Liquid
濃 度;1mg/ml
免 疫 原;KLH conjugated Synthesised
phosphopeptide derived from human PKA R2 around the phosphorylation site of
Ser99: RV(p-S)VC
亞 型;IgG
純化方法;affinity purified by Protein A
保存條件;Shipped at 4℃. Store at -20 °C for one year. Avoid
repeated freeze/thaw cycles.
注意事項;This product as supplied is
intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic
applications.
抗體注意事項:
確定抗體的名字和特性:?注意抗體的中英文名字、?它名、?亞型等信息,?這些信息對于選擇正確的抗體至關重要。?
明確實驗類型:?了解你的實驗類型(?如ELISA、?WB、?IHC、?ICC或FACS)?,?因為抗體的說明書通常會列出該抗體經驗證過的實驗類型。?如果說明書沒有提及某種應用類型,?并不意味著該抗體不適用于該實驗,?只是表示尚未經過該實驗驗證。?
選擇適當的實驗樣本種屬:?確定你的實驗樣本是來自人類、?小鼠還是大鼠等,?因為抗體的說明書會列出該抗體經試驗驗證過的物種。?
考慮樣本蛋白的結構性質:?了解樣本蛋白的結構性質有助于選擇的抗體,?特別是當樣本蛋白在提取和處理過程中可能會變性時,?這會影響抗體的親和反應。?
單多克隆抗體的選擇:?單克隆抗體特異性強但親和力相對小,?而多克隆抗體特異性稍弱但親和力強。?根據實驗需求選擇合適的抗體。?
注意抗體的特異性:?原的類型對抗體對靶蛋白的特異性有顯著影響。?應選擇針對已充分表征的原產生的抗體,?避免使用不合適或質量差的原產生的抗體。?
封閉液的選擇:?封閉液的選擇應根據抗體說明書進行,?常用的封閉液包括脫脂奶粉和BSA。?封閉液的目的是封閉非特異性結合位點,?降低背景噪音3。?
抗體孵育注意事項:?使用干凈的孵育盒子,?避免油脂等雜物沾到膜上造成非特異信號。?如果一次性需要檢測多個蛋白,?可以考慮將膜剪開或采用其他技術如抗體洗脫液處理后再次使用膜
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