使用方法:

一、樣品 RNA 的制備

1、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意：可以選用本公司生產的一管式病毒 RNAout

2、或柱式病毒 RNAout。

二：RT（逆轉錄）反應合成 cDNA

1. 按下表配制 RT 反應體系（20 μL 體系）

2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。

3. 嚴格按順序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆轉錄酶（含 RI），

反應終體積為 20μL。

4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應。

5. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用，丌需要純化。

訂購信息：

產品名稱：牛源性成分(Bovine)熒光-PCR法

英文名稱：詳見說明
貨號：BJ-01R5027

產品規格：48T/盒

運輸：低溫

保存：負20度

有效期：一年

貨期：現貨

【儲存條件及有效期】:

-20℃避光保存，避免反復凍融，有效期6個月。

【適用儀器】:

ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。

【樣本采集、存放及運輸】：

u 樣本采集：各類型樣本按照常規方法采集；

u 存放：樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應避免反復凍融（多凍融3次）；

u 運輸：采用**或泡沫箱加冰密封進行運輸。

本公司產品僅用于科研。

【自備試劑】:

核酸提取試劑，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒，也可選擇其他合適的核酸提取產品。

組成及試劑配制:

1、 酶標板：一塊（96孔）

2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。

3、 樣品稀釋液：1×20ml。

4、 檢測稀釋液A：1×10ml。

5、 檢測稀釋液B：1×10ml。

實驗注意事項：

1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；

2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；

3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。

4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括量和相對定量）和定性分析。

主要服務：DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。

主要技術：引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

PCR反應的特異性決定因素為：

①引物與模板DNA特異正確的結合；

②堿基配對原則；

③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性；

④靶基因的特異性與保守性。

其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行，結合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區，其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高

PCR產物的**量是以指數方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位)；在學中zui小檢出率為3個。

(3) 簡便、快速

PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應，一般在2～4 小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。

(4) 對標本的純度要求低

不需要分離病毒或及培養細胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板?？芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發、細胞、活PCR技術概論。

H-His(Trt)-2-Chlorotrityl Resin  1mg  StemRegenin 1 (SR1)  10mg    

Pardoprunox (SLV-308)  500μg  UNC0321  5g    

NIM811 ((Melle-4)cyclosporin)  5μg  Chebulagic acid  100mg    

XL-784 free base  25g  Tyramine-d4 (hydrochloride)  10mM*1mLinWater    

INK1117  25g  Prochlorperazine (maleate)  10mg    

Veratraldehyde  1mg  EED Human  50mg    

CCX140  50mg  HAV P2C-P3B  25g    

(D-Trp11)-Neurotensin  5mg  Talabostat isomer mesylate  1mg    

Myoglobin His Human  10mg  Bcl 2 Human (minus BH3 domain)  5mg    

HPV 6  10mg  T4 DNA  5mg    

Lapaquistat  1mg  CD28 Human  50mg    

RGS5 Human  20μg  MDL 105519  1mg    

XPA Human  10mg  IL 1RA Human  100μg    

GALE Human  50mg  Rabacfosadine (GS-9219)  5μg    

TANK Human  1mg  Pimobendan hydrochloride  5mg    

牛源性成分(Bovine)熒光-PCR法6,7-Dimethoxyquinolin-4-ol  中文名稱：4-羥基-6,7-二甲氧基喹啉CAS號：13425-93-9中文別名：4-羥基-6,7-二甲氧基喹啉;6,7-二甲氧基-4-羥基喹啉;2-叔丁基-4-

(2R)-2-(phenylmethoxycarbonylamino)propanoic acid  中文名稱：Cbz-D-丙氨酸CAS號：26607-51-2中文別名：Cbz-D-丙氨酸;N-芐氧羰基-D-丙氨酸;N-CBZ-D-丙氨酸;(R)-2-(((芐氧

2-AMino-4,5-bis((4-Methoxybenzyl)oxy)benzoic acid  中文名稱：2-Amino-4,5-bis((4-methoxybenzyl)oxy)benzoic acidCAS號：1609073-29-1中文別名：2-氨基

Spiro[furo[3,4-c]pyridine-3(1H),4'-piperidin]-1-one hydrochlorid  中文名稱：螺[呋喃并[3,4-c]吡啶-3(1H),4'-啶]-1-酮鹽酸鹽CAS號：475152-16-0中文別名：螺[呋喃并[3,4-c]吡啶-3(1H)

DC037021  英文別名：6H-Benzo[g]-1,3-benzodioxolo[5,6-a]quinolizine,5,8,13,13a-tetrahydro-10,11-

2-amino-6-methyl-4-chloro-7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidine  中文名稱：CAS號：204929-06-6中文別名：英文名稱：4-chloro-6-methyl-7H-Pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-2-am

(3R,4R,6aR)-tert-butyl-(5-fluoro-2,2-dimethyl-6-trityloxymethyl-4,6a-dihydro-3aH-cyclopenta[1,3]dioxol-4-yloxy)-diphenyl-silane  中文名稱：RX-3117中間體CAS號：805245-41-4中文別名：(((3aR,4R,6aR)-5-氟-2,2-二甲基-6-((甲苯磺酰氧基)甲基)-4,

2-ethoxy-5-(4-ethylpiperazin-1-yl)sulfonylbenzoic acid  

N-(trans-4-phenylcyclohexyl)-Carbamic acid 1,1-dimethylethyl ester  中文別名：N-(trans-4-phenylcyclohexyl)-Carbamic acid 1,1-dimethylethyl ester 英文名稱：N-(

N-[2-(4-bromophenyl)ethyl]-2-methylpropanamide  中文名稱：N-[2-(4-Bromophenyl)ethyl]-2-methylpropanamideCAS號：304664-15-1中文別名：N-(4-硝基苯

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