基本信息：
產(chǎn)品名稱：弗氏檸檬酸桿菌說明書
拉丁文: Citrobacter│freundii
分離基物: 養(yǎng)豬場(chǎng)發(fā)酵床墊料
提供形式: 凍干物
**等級(jí): 2
模式菌株: no
培養(yǎng)基: 2
生長(zhǎng)條件: 30℃
存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
培養(yǎng)方法:
培養(yǎng)基 0012
生長(zhǎng)條件 28℃
存儲(chǔ)條件 液氮超低溫凍結(jié)法；礦物油法；定期移植法
培養(yǎng)及打管說明：
1、安瓿瓶開封：用浸過75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量無菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端。
2、菌株恢復(fù)培養(yǎng)：用無菌吸管吸取0.3--0.5ml適宜的液體培養(yǎng)基，滴入安瓿管內(nèi)，輕輕振蕩，使凍干菌體溶解呈懸浮狀。吸取全部菌體懸浮液，移植于1-2支建議的培養(yǎng)基試管中，并在建議的條件下培養(yǎng)。
3、注意事項(xiàng)：菌種活化前，請(qǐng)將安瓿管保存在6-10℃的環(huán)境下，某些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后，延遲期較長(zhǎng)，需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長(zhǎng)
4、復(fù)蘇后的菌種在傳1-2代后使用。
5、暫不啟開的安瓿及復(fù)蘇后需保藏的斜面應(yīng)于4℃中保藏。
保藏方法：
1. 傳代培養(yǎng)保藏法
又有斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng)、皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)等（后者作保藏厭氧**用），培養(yǎng)后于4-6℃冰箱內(nèi)保存。
2. 液體石蠟覆蓋保藏法
是傳代培養(yǎng)的變相方法，能夠適當(dāng)延長(zhǎng)保藏時(shí)間，它是在斜面培養(yǎng)物和穿刺培養(yǎng)物上面覆蓋的液體石蠟，一方面可防止因培養(yǎng)基水分蒸發(fā)而引起菌種死亡，另一方面可阻止氧氣進(jìn)入，以減弱代謝作用。
3. 載體保藏法
是將微生物吸附在適當(dāng)?shù)妮d體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而后進(jìn)行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和濾紙保藏法應(yīng)用相當(dāng)廣泛。
4. 寄主保藏法
用于目前尚不能在人工培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的微生物，如病毒、立克次氏體、螺旋體等，它們必須在生活的動(dòng)物、昆蟲、雞胚內(nèi)感染并傳代，此法相當(dāng)于一般微生物的傳代培養(yǎng)保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法與冷凍干燥保藏法進(jìn)行保藏。
5. 冷凍保藏法
可分低溫冰箱（-20-30℃，-50-80℃）、干冰酒精快速凍結(jié)（約-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。
6. 冷凍干燥保藏法
先使微生物在極低溫度（-70℃左右）下快速冷凍，然后在減壓下利用升華現(xiàn)象除去水分（真空干燥）。有些方法如濾紙保藏法、液氮保藏法和冷凍干燥保藏法等均需使用保護(hù)劑來制備細(xì)胞懸液，以防止因冷凍或水分不斷升華對(duì)細(xì)胞的損害。
TCH（噻吩-2-羧酸酰肼） 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 加入改良羅氏培養(yǎng)基中制成TCH培養(yǎng)基，用于分枝桿鑒定 0.1
全胃浸粉 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 250克 全胃浸粉 BR
蛋黃軟磷脂 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 10克 Lecithin from egg yolk BR
4號(hào)培養(yǎng)基 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 250克 Antibiotic Agar NO.4 兩性霉素B等的效價(jià)測(cè)定
BL培養(yǎng)基 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 250克 Bile Lactose Broth 大腸桿和綠膿桿的增培養(yǎng)
克氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 250克 Christensen Citrate Medium 腸桿鑒別
膽鹽七葉苷疊氮鈉瓊脂 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 250克 Bile Esculin Azide Agar 用于腸球的快速選擇性分離培養(yǎng)和計(jì)數(shù)
普通肉湯瓊脂平板 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 50塊 Nutrient Agar Plate 一般細(xì)的培養(yǎng)和細(xì)總數(shù)的測(cè)定
支原體瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 250克 Mycoplasma Agar Base 用于支原體的分離培養(yǎng)
弗氏檸檬酸桿菌說明書Rabbit Anti-human IgG F(ab')2/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗人IgG F(ab')2 0.1ml
Classical swine fever virus 抗豬瘟抗體 0.2ml
HBA1/Alpha globin/Hemoglobin 血紅蛋白α1抗體 0.1ml
TSLP (human) 胸腺基質(zhì)細(xì)胞**素-1抗體(人) 0.2ml
LTB4-R1/BLTR 白三烯B4受體1抗體 0.1ml
Mouse Anti-Guinea pig IgG/Gold 膠體金標(biāo)記的小鼠抗豚鼠IgG 0.5ml
Phospho-FoxO1(Thr24)/FoxO3a(Thr32) 磷酸化叉頭蛋白家族抗體 0.1ml
SOD2 超氧化物歧化酶2抗體 0.1ml
PACAP-38 腺苷酸環(huán)化酶激活肽-38抗體 0.1ml
IL-19/NG.1 白細(xì)胞介素-19抗體 0.2ml
Goat Anti-Bovine IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的羊抗牛IgG 0.1ml
NEDD8 泛素樣蛋白NEDD8抗體 0.2ml
Rabbit Anti-mouse IgG-Fc/Cy5 Cy5標(biāo)記的兔抗小鼠IgG-Fc 0.1ml
微生物菌種的培養(yǎng)：
⒈ 孢子制備
⑴ 放線菌孢子的制備
一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營(yíng)養(yǎng)成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無機(jī)鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過0.5％)，碳源豐富容易造成生理酸性的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，不利于放線菌孢子的形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下，干燥和限制營(yíng)養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)孢子形成。放線菌斜面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃，少數(shù)為37 ℃，培養(yǎng)時(shí)間為5～14天。
⑵ 霉菌孢子的制備
霉菌的孢子培養(yǎng)，一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營(yíng)養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養(yǎng)基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25～28 ℃，培養(yǎng)時(shí)間為4～14天。
⒉ 種子制備
⑴ 搖瓶種子制備
搖瓶種子進(jìn)罐，常采用母瓶、子瓶?jī)杉?jí)培養(yǎng)，有時(shí)母瓶種子也可以直接進(jìn)罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和完全，并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長(zhǎng)。原則上各種營(yíng)養(yǎng)成分不宜過濃，子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高，更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。
⑵ 種子罐種子制備
種子罐種子制備的工藝過程，因菌種不同而異，一般可分為種子、二級(jí)種子和三級(jí)種子的制備。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中，經(jīng)培養(yǎng)后形成大量的菌絲，這樣的種子稱為種子，把種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵，稱為二級(jí)發(fā)酵。如果將種子接入體積較大的種子罐內(nèi)，經(jīng)過培養(yǎng)形成更多的菌絲，這樣制備的種子稱為二級(jí)種子，將二級(jí)種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵，稱為三級(jí)發(fā)酵。同樣道理，使用三級(jí)種子的發(fā)酵，稱為四級(jí)發(fā)酵。
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