微生物菌種的培養(yǎng)：

⒈ 孢子制備

⑴ 放線菌孢子的制備

一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中含有一些適合產孢子的營養(yǎng)成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無機鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過0.5％)，碳源豐富容易造成生理酸性的營養(yǎng)環(huán)境，不利于放線菌孢子的形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下，干燥和限制營養(yǎng)可直接或間接誘導孢子形成。放線菌斜面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃，少數(shù)為37 ℃，培養(yǎng)時間為5～14天。

⑵ 霉菌孢子的制備

霉菌的孢子培養(yǎng)，一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農產品為培養(yǎng)基。這是由于這些農產品中的營養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養(yǎng)基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25～28 ℃，培養(yǎng)時間為4～14天。

⒉ 種子制備

⑴ 搖瓶種子制備

搖瓶種子進罐，常采用母瓶、子瓶兩級培養(yǎng)，有時母瓶種子也可以直接進罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和完全，并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長。原則上各種營養(yǎng)成分不宜過濃，子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高，更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。

⑵ 種子罐種子制備

種子罐種子制備的工藝過程，因菌種不同而異，一般可分為種子、二級種子和三級種子的制備。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中，經培養(yǎng)后形成大量的菌絲，這樣的種子稱為種子，把種子轉入發(fā)酵罐內發(fā)酵，稱為二級發(fā)酵。如果將種子接入體積較大的種子罐內，經過培養(yǎng)形成更多的菌絲，這樣制備的種子稱為二級種子，將二級種子轉入發(fā)酵罐內發(fā)酵，稱為三級發(fā)酵。同樣道理，使用三級種子的發(fā)酵，稱為四級發(fā)酵。

基本信息：

產品名稱：扭脫甲基桿菌

拉丁文： Methylobacterium extorquens

提供形式： 凍干物

**等級： 1

模式菌株： yes

應用領域： 分類。

培養(yǎng)方法:

培養(yǎng)基 0012

生長條件 28℃

存儲條件 液氮超低溫凍結法；礦物油法；定期移植法

培養(yǎng)及打管說明：

1、安瓿瓶開封：用浸過75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量無菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端。

2、菌株恢復培養(yǎng)：用無菌吸管吸取0.3--0.5ml適宜的液體培養(yǎng)基，滴入安瓿管內，輕輕振蕩，使凍干菌體溶解呈懸浮狀。吸取全部菌體懸浮液，移植于1-2支建議的培養(yǎng)基試管中，并在建議的條件下培養(yǎng)。

3、注意事項：菌種活化前，請將安瓿管保存在6-10℃的環(huán)境下，某些菌種經過冷凍干燥保存后，延遲期較長，需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長

4、復蘇后的菌種在傳1-2代后使用。

5、暫不啟開的安瓿及復蘇后需保藏的斜面應于4℃中保藏。

保藏方法：

1. 傳代培養(yǎng)保藏法

又有斜面培養(yǎng)、穿???培養(yǎng)、皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)等（后者作保藏厭氧**用），培養(yǎng)后于4-6℃冰箱內保存。

2. 液體石蠟覆蓋保藏法

是傳代培養(yǎng)的變相方法，能夠適當延長保藏時間，它是在斜面培養(yǎng)物和穿刺培養(yǎng)物上面覆蓋的液體石蠟，一方面可防止因培養(yǎng)基水分蒸發(fā)而引起菌種死亡，另一方面可阻止氧氣進入，以減弱代謝作用。

3. 載體保藏法

是將微生物吸附在適當?shù)妮d體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而后進行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和濾紙保藏法應用相當廣泛。

4. 寄主保藏法

用于目前尚不能在人工培養(yǎng)基上生長的微生物，如病毒、立克次氏體、螺旋體等，它們必須在生活的動物、昆蟲、雞胚內感染并傳代，此法相當于一般微生物的傳代培養(yǎng)保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法與冷凍干燥保藏法進行保藏。

5. 冷凍保藏法

可分低溫冰箱（-20-30℃，-50-80℃）、干冰酒精快速凍結（約-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。

6. 冷凍干燥保藏法

先使微生物在極低溫度（-70℃左右）下快速冷凍，然后在減壓下利用升華現(xiàn)象除去水分（真空干燥）。有些方法如濾紙保藏法、液氮保藏法和冷凍干燥保藏法等均需使用保護劑來制備細胞懸液，以防止因冷凍或水分不斷升華對細胞的損害。

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