為確保ELISA試劑盒檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，需從?操作規(guī)范、質(zhì)控措施、注意事項(xiàng)?三方面嚴(yán)格把控。以下是具體要點(diǎn)：

一、規(guī)范操作流程

1、?加樣規(guī)范

使用校準(zhǔn)后的移液器，選擇密封性好的吸頭，避免漏液或氣泡。

垂直懸空加樣，避免液體濺到孔壁或產(chǎn)生氣泡，若濺出需用吸水紙吸干并記錄。

標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議設(shè)置復(fù)孔，通過平均值減少誤差，并評估操作精密度。

2、?孵育與洗滌

孵育時推薦震蕩（如水平振蕩器），促進(jìn)抗原抗體充分結(jié)合，提高反應(yīng)效率。

手工洗板需垂直拍干，避免交叉污染；機(jī)器洗板需檢查沖洗頭是否堵塞。

3、?顯色與終止

顯色時間需嚴(yán)格控制（通常10-20分鐘），避免過度反應(yīng)導(dǎo)致假陽性。

終止反應(yīng)后需立即讀數(shù)，延遲可能導(dǎo)致結(jié)果偏差。

二、嚴(yán)格質(zhì)控措施

1、?實(shí)驗(yàn)前檢查

確認(rèn)試劑盒在有效期內(nèi)，各組份（如標(biāo)準(zhǔn)品、酶標(biāo)板）無破損或污染。

校準(zhǔn)儀器（如酶標(biāo)儀、恒溫箱），確保設(shè)備狀態(tài)正常。

2、?實(shí)驗(yàn)過程質(zhì)控

使用質(zhì)控品（如高、中、低濃度）監(jiān)控實(shí)驗(yàn)穩(wěn)定性，避免反復(fù)凍融導(dǎo)致蛋白變性。

標(biāo)準(zhǔn)品需嚴(yán)格按說明書溶解和稀釋，避免吹吸未完全溶解的蛋白。

3、?結(jié)果分析

標(biāo)準(zhǔn)曲線R2值應(yīng)≥0.99，復(fù)孔CV值需<15%。

若結(jié)果異常，需排查加樣誤差、洗滌不充分或試劑失效等問題。

三、關(guān)鍵注意事項(xiàng)

1、?試劑與樣本處理

所有試劑和樣本需平衡至室溫后再使用，避免溫度差異影響反應(yīng)動力學(xué)。

凍存樣本需在2-8℃解凍，避免室溫直接解凍導(dǎo)致蛋白降解。

2、?操作細(xì)節(jié)

避免交叉污染：每孔更換槍頭，不同樣本分開操作。

顯色時需避光，防止光敏試劑失效。

3、?儲存條件

未使用的酶標(biāo)板需密封保存，液體試劑（如抗體）需按說明書要求儲存（如2-8℃或-20℃）?。

四、常見問題自查

若結(jié)果異常，可參考以下步驟排查：

檢查加樣是否準(zhǔn)確，排除漏液或氣泡干擾。

確認(rèn)洗滌是否充分，避免殘留物導(dǎo)致高背景。

驗(yàn)證試劑是否過期或儲存不當(dāng)。

通過以上規(guī)范操作、質(zhì)控和注意事項(xiàng)，可顯著提升ELISA檢測的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。