分離PBMC（外周血體積≤5ml）
說明：
這個細胞是多能間分離PBMC（外周血體積≤5ml），又名間充質干細胞，是特征明確的一類干細胞。它們有發育為成熟細胞的潛在能力而產生脂肪、軟骨、骨骼和肌肉。這些特性與它們發育中的可塑性共同作用使人們對用間充質干細胞來替換受損組織的潛在能力產生了極大的興趣。間充質干細胞無血清培養，在轉化生長因子作用下會分化成軟骨細胞。相反，在有血清、抗壞血酸和地塞米松的作用下會分化成成骨細胞。間充質干細胞有能力更新和分化成多種間充質組織。間充質干細胞由羊膜和絨毛膜中提取得到，表達的CD271控制心肌細胞的特征、并有多種抗血管生成蛋白和**癥蛋白。
的種類和表面標記
通過流式細胞儀分析，間充質干細胞特異性表面抗原有：SH2、SH3、CD29、CD44、CD71、CD90、CD106、CD120a、CD124。BMSC：是骨髓中除HSC 以外的非造血性干細胞，骨髓中絕大多數是HSC，BMSC 只占骨髓有核細胞的0.001%～0.01% 。因此鑒定BMSC 的方法是在骨髓的干細胞中排除HSC——BMSC：CD45-、CD34-、CD29+、 CD14+/ HSC：CD34+。
間質分離PBMC（外周血體積≤5ml）培養原理概述
間質干細胞（mesenchymal stem cell，MSC）是一群中胚層來源的具有自我更新和多向分化潛能的多能干細胞，在適宜的培養條件下可分化成多種組織細胞，包括成骨細胞、軟骨細胞、肌肉細胞、脂肪細胞等。
間質干細胞*早是從骨髓中分離得到的，正常情況下，它在骨髓中的比例非常低，僅占單核細胞的1/105 ~1/104 。骨髓中單個核細胞包括**細胞和單核細胞，其體積、形態和密度與其他細胞不同，紅細胞和多核白細胞密度較大，為1.090 g/ml左右，而**細胞和單核細胞密度為1.075~1.090 g/ml，血小板為1.030~1.035 g/ml。為此利用一種密度介于1.075~1.092 g/ml之間而近于等滲的溶液（分層液）進行密度梯度離心，使一定密度的細胞按相應密度梯度分布，從而將各種血細胞加以分離。常用的分層液有Ficoll和Percoll兩種。
在骨髓的原代培養物中，除了貼壁生長的成纖維細胞樣的間質干細胞外，還混雜著一些巨噬細胞、單核細胞、造血細胞及紅細胞等，要得到較均一的間質干細胞，必須除去其他細胞。根據其他細胞的特性，可采用不同的方式排除它們。對于紅細胞，因其不貼壁，可通過換液除去。對于貼壁的單核巨噬細胞，可根據其黏附能力的不同，通過調整Trypsin/EDTA 的消化時間，保證間質干細胞在短暫的作用時間內與塑料培養瓶壁分離，而巨噬細胞、單核細胞、造血細胞等仍貼附于培養瓶壁，從而使間質干細胞與其他的貼壁細胞得到分離。
分離PBMC（外周血體積≤5ml）在傳代培養中，接種密度是影響體外培養間質干細胞增殖潛能的重要因素。低密度接種時，間質干細胞的增殖能力明顯提高，而誘導細胞分化時則需要較高的細胞密度，這可能與分化時細胞與細胞間的相互作用有關。而在培養過程中，若細胞過度融合會促進其分化趨向，故要保持干細胞未分化狀態，要及時傳代。