【產(chǎn)品簡介】

β-興奮劑類(β-Agonists)**近年來被非法添加到飼料中以提高脂肪型動(dòng)物的瘦肉率和加速動(dòng)物生長，因其添加劑量是**劑量的5-10倍，以至于在動(dòng)物體內(nèi)殘留量高而給消費(fèi)者帶來危害。

β-興奮劑類快速檢測試劑盒具有方便、快速、靈敏等特點(diǎn)，適用于動(dòng)物組織（豬肉）、尿樣、飼料等大批量樣品中β-興奮劑類**殘留量的快速檢測。

β興奮劑試劑盒【測定原理】

本試劑盒采用間接競爭ELISA法檢測尿樣和組織等樣本中的β-興奮劑，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，利用抗原與抗體的特異性**化學(xué)反應(yīng)的原理來進(jìn)行，樣本中的β-興奮劑和微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗β-興奮劑抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣品中的β-興奮劑含量與樣品的吸光度值呈反比，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出β-興奮劑含量。

【試劑盒技術(shù)指標(biāo)】  

規(guī)      格：96孔/盒

靈 敏 度： 0.2ppb

檢測時(shí)間： 75min

樣本檢測下限：

尿     樣   ……… ……………………………………0.2ppb

組織（處理法一） ……………………………… 0.8ppb

組織（處理法二） ……………………………… 0.2ppb

飼      料  ……… ……………………………………2ppb

β興奮劑試劑盒交叉反應(yīng)率：

沙丁胺醇（Salbutamol ）……… …………………………100%

克倫特羅（Clenbuterol）……… …………………………95%

溴代克倫特羅（Bromchlorbuterol）……………… …… 120%

溴布特羅（Brombuterol）……… ………………………  95%

馬布特羅（Mabuterol）……… …………………………  75%

克倫潘特羅（Clenpenterol）……… …………………… 70%

馬噴特羅（Mapenterol）……… ………………………… 65%

特普他林（Tebutalin）……… ……………………………45%

卡布特羅(Carbuterol) ……… …………………………… 5%

 克倫丙羅（Clenproperol）……… ……………………… 15%

西馬特羅（Cimaterol）……… …………………………  12%

多巴酚丁胺（Dobutamine) ……… …………………… ＜1%

利托君（Ritodrine）……… ……………………………＜0.1%

萊克多巴胺（Ractopamine）……… ………………… ＜0.1%

樣本回收率：

尿樣、血清  …………………………………………95%±10%

組     織   …………………………………………… 80%±10%

飼     料   …………………………………………… 80%±15%

【試劑盒組成】

1、      微量測試孔：1×96孔板（12條×8孔）

2、      標(biāo)準(zhǔn)溶液X6瓶：（1ml/瓶）0ppb、0.2ppb、0.6ppb、1.8ppb、5.4ppb、16.2ppb

3、      酶標(biāo)記物   12ml  …………………………………………  紅色帽

4、      抗體工作液 10ml  …………………………………………綠色帽

5、      底物A液  7ml  ……………………………………………棕色帽

6、      底物B液  7ml  …………………………………………… 黑色帽

7、      終止液      7ml  …………………………………………… 黃色帽

8、      20X 濃縮洗滌液 40 ml……………………………………白色帽

β興奮劑試劑盒【 所用儀器、試劑】

具備的儀器：微孔酶標(biāo)儀、氮?dú)獯蹈裳b置、打印機(jī)、均質(zhì)器 、振蕩器、離心機(jī)、恒溫箱、天平（感量0.01g）、刻度移液管

微量移液器：單道20μl-200μl、100μl-1000μl、多道250μl

試     劑：氫氧化鈉、乙酸乙酯、正己烷、濃HCl、乙腈、無水硫酸鈉、甲醇

【實(shí)驗(yàn)前溶液配制】

配液1、0.1M HCl 溶液取0.86ml濃HCl加水定溶至100ml。

配液2、0.1M NaOH 溶液稱取0.4g NaOH加水定溶至100ml。

配液3、乙腈-0.1M HCl 溶液 V_乙腈：V_HCl =84：16

配液4、將40ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水按照1：19稀釋（1份濃縮洗滌液+19份去離子水），或按所需用量配制洗滌液。

【樣本前處理步驟】

樣本處理前須知

處理任何樣本時(shí)，都必須注意：

（a）實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時(shí)要更換吸頭。

（c）實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈，必要時(shí)可對(duì)實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

樣本前處理方法：

（a）尿樣本的處理方法   

    取20μl清亮尿樣直接測定（如果尿樣渾濁一定要 過濾或離心10min，4000r/min，直至得到清亮尿樣），暫不使用的樣本應(yīng)冷凍保存。                          樣本稀釋倍數(shù)：1

（b））豬肝、豬肉等組織處理方法一

1、 稱2±0.05g組織，加入6ml去離子水，充分振蕩2min，室溫4000r/min以上離心10min。

2、 取20μl上清液進(jìn)行分析。

樣本稀釋倍數(shù)：4

（c）豬肝、豬肉等組織處理方法二

1、  稱取 2 ± 0.05g 的組織， 加入6ml乙腈-0.1MHCl，振蕩2min,室溫4000r/min以上離心10min。

2、  取上清3ml，加入2ml 0.1M NaOH，加入6ml乙酸乙酯，振蕩1min，室溫4000r/min 以上離心10min。取全部上清于50℃氮?dú)饣蚩諝獯蹈伞?

3、  加入1ml三蒸水復(fù)溶，混合30s，取20μl進(jìn)行分析。

樣本稀釋倍數(shù)：1

（d）飼料樣品的處理方法

1.   稱1.0±0.05g研碎的飼料樣品，加入10ml水，放振蕩器上振蕩2min；15℃ 4000r/min以上離心10min；

2.   吸出離心后的上清液1ml，于56℃氮?dú)獯蹈?，? ml  去離子水溶解干燥的殘留物，再加入1mL正己烷混合30s ；15℃ 4000r/min以上離心5min。

3.   取20μl下層進(jìn)行分析。

樣本稀釋倍數(shù)：10

（e）熟食處理方法

1、將樣本均質(zhì)，稱 2±0.05g 組織到 50ml離心管中， 加入 10ml甲醇，振蕩 2min,置85℃水浴 10min，室溫 4000r/min 以上離心 5min，倒去上層甲醇；

2、接方法（一）或者方法（二）第 2 步處理方法；

注：樣本稀釋倍數(shù)與后接的處理方法相同

【酶標(biāo)**分析程序】

1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置室溫（20-25℃）平衡30min以上, 注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

2、按需要取出微孔條及板架，將不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。

3、編號(hào)：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每個(gè)樣品和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

4、往酶標(biāo)板微孔中加標(biāo)準(zhǔn)溶液或試樣液 20μl/孔，然后加入 β-興奮劑抗體工作液 80μl/孔，用蓋板膜封板，25℃環(huán)境中反應(yīng) 30min。

5、倒出孔中液體，將酶標(biāo)板倒置在吸水紙上拍打，去除孔中液體。加入 250μl/孔洗滌液，15-30s 后倒出孔中液體，用吸水紙拍干，如此重復(fù)操作共洗板 5 次。

6、酶標(biāo)記物：加入酶標(biāo)記物 100μl/孔，用蓋板膜封板，25℃環(huán)境中反應(yīng) 30min。取出酶標(biāo)板，如前述洗板 5 次；

7、顯色：每孔先加入底物液A液50μl，再加底物B液50μl，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境中避光顯色15min。

8、測定：每孔加入終止液50μl，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，在5min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），測定吸光度值（OD值）。

β興奮劑試劑盒【結(jié)果判定】

結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與其所含β-興奮劑的含量成負(fù)相關(guān)。

1、粗略判定：

用樣品的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出樣本所含β-興奮劑濃度范圍（ng/ml）。假設(shè)樣品1的吸光度值為0.313，樣品2的吸光度值為1.032，標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是：0ppb為1.892；0.2ppb為1.501；0.6ppb為1.175； 1.8ppb為0.751；5.4ppb為0.421； 16.2ppb為0.198。則樣品1的濃度范圍是5.4ppb-16.2ppb；樣品2的濃度范圍是0.6ppb-1.8ppb。乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中β-興奮劑實(shí)際濃度。             

2、定量分析：

所獲得的每個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的平均值（B）除以**個(gè)標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值（B₀）再乘以100%，即百分吸光度值。

B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

B₀—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以β-興奮劑標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ng/ml）的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中β-興奮劑實(shí)際濃度。

若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算，更便于大量樣品的準(zhǔn)確、快速分析。

3、標(biāo)準(zhǔn)曲線：

B/B0 (%)

0.2       0.6           1.8        5.4        16.2

β-興奮劑(ppb) [μg/kg]

              圖1：β-興奮劑檢測試劑盒的回歸曲線

4、再現(xiàn)性：

%CV

             0         0.2      0.6          1.8       5.4     1.62

β-興奮劑(ppb) [μg/kg]

圖2：β-興奮劑檢測試劑盒的精密度

由多個(gè)不同的實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定了精密度，圖2顯示出β-興奮劑檢測試劑盒的精密度情況，獲得的標(biāo)準(zhǔn)吸收值的變異系數(shù)（%CV）對(duì)相應(yīng)β-興奮劑濃度作曲線，可以看到在全部范圍內(nèi)變異系數(shù)如此之低，可以得到很好的再現(xiàn)性。

【注意事項(xiàng)】

1、使用前將所有試劑溫度回升至室溫20-25℃。試劑及標(biāo)本沒有回到室溫（20-25℃）會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。

2、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會(huì)伴隨著出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一

     步操作。

3、混合要均勻，否則會(huì)出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。

4、反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。

5、不要使用過了有效日期的試劑盒，稀釋或攙雜使用會(huì)引起靈敏度、OD值的變化。不要交換使用不同批號(hào)的盒中試劑。

6、不用的微孔板放進(jìn)自封袋密封；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對(duì)光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。

7、顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個(gè)單位（A_450nm< 0.5 ）時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。

8、該試劑盒*佳反應(yīng)溫度為25℃，溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

【儲(chǔ)存】

原包裝應(yīng)儲(chǔ)存于2～8℃保鮮冷藏，切勿冷凍。

【有效期】

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