孔雀石綠試劑盒
產(chǎn)品介紹
【產(chǎn)品簡介】
孔雀石綠因有非常好的**作用和藥動力學的特性，曾經(jīng)被廣泛應用，殘留危害人類健康，現(xiàn)已禁用。
孔雀石綠快速檢測試劑盒具有方便、快速、靈敏等特點，適用于動物組織（水產(chǎn)、雞、豬、牛）、牛奶、飼料等大批量樣品中的孔雀石綠快速檢測。
孔雀石綠試劑盒【測定原理】
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預包被偶聯(lián)抗原，樣本中的殘留物孔雀石綠和微孔條上預包被的偶聯(lián)抗原競爭孔雀石綠抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物孔雀石綠的含量成負相關，與標準曲線比較可得出相應殘留物孔雀石綠的含量。
【試劑盒技術指標】
規(guī) 格：96孔/盒
靈 敏 度： 0.05ppb
檢測時間： 75min
樣本檢測下限：
組織\水樣…………………………………………0.5ppb
參考標準GB/T 20361-2006檢測下限為0.5ppb
交叉反應率：
顯性孔雀石綠……………………………………100%
回收率：
組織……………………………………………75±10%
水樣 ……………………………………………80±10%
【試劑盒組成】
1、 微量測試孔：每條8孔，一板12條
2、 標準溶液X6瓶：（1ml/瓶）0ppb、0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35ppb、4.05ppb
3、 酶標記物 12ml…………………………紅色帽
4、 抗體工作液 7ml…………………………綠色帽
5、 底物液 A液 7ml…………………………棕色帽
6、 底物液 B液 7ml…………………………黑色帽
7、 終 止 液 7ml…………………………黃色帽
8、 20X濃縮洗滌液40ml…………………… 白色帽
9、 2X濃縮樣品稀釋液50 ml…………………藍色帽
10、 試劑A 10 ml………………………………黑色帽
孔雀石綠試劑盒【實驗前溶液配制】
配液1、樣品提取液的配制取1 ml試劑A 與99 ml乙氰混合均勻，用于樣本提取，
配液2、將2X濃縮復溶液用去離子水按照1：1稀釋（1 份濃縮復溶液+1份去離子水）用于樣本的復溶。
配液3、將40ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水按照1：19稀釋（1份濃縮洗滌液+19份去離子水），或按 所需用量配制洗滌
液。
【所用儀器、試劑】
儀 器：微孔板酶標儀450nm/630nm、旋轉蒸發(fā)儀/氮氣吹干裝置、均質(zhì)器、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平
（感量0.01g ）
微量移液器：單道 20μl～200μl、100μl～1000μl、多道 250μl
試 劑：乙腈、中性氧化鋁
【樣本前處理步驟】
樣本處理前須知
處理任何樣本時，都必須注意：
（a）實驗中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時要更換吸頭。
（b）實驗前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時對實驗器具進行清潔，避免污染干擾實驗結果。
樣本處理方法
（a）組織樣品處理方法：
1、 稱取5±0.05g組織樣品于50ml離心管中，加入10ml樣品提取液，充分震蕩5min，室溫4000r/min以上，離心10min；
2、 取6ml上清液于另一干凈玻璃管中，加入3g中性氧化鋁；震蕩2min ，靜止10min；
3、 取2ml上清液于玻璃管中，在56℃條件下氮氣或空氣流吹至完全干燥；
4、 加入1ml樣品稀釋液，充分溶解干燥殘留物。
5、 取50 μl上清液與450μl樣品稀釋液混合30s；
6、 取50ul進行分析。
樣本稀釋倍數(shù)： 10倍
（b）水樣品處理方法：
1、取50ul 上清液與450ul 樣品稀釋液充分混合30s，
2、取50ul進行分析。
樣本稀釋倍數(shù)：10倍
孔雀石綠試劑盒【酶標**分析程序】
操作步驟：
1、 從4℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑，置室 溫（20-25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、 取出框架及需要數(shù)量的微孔，將不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。
3、 編號：將樣本和標準品對應微孔按序編號，每個樣本和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
4、 加標準品或樣本50μl/孔到各自的微孔中，然后加抗體50μl/孔，用蓋板膜封板，輕輕振蕩混勻。25℃環(huán)境中反應30min。
5、 取出將孔內(nèi)液體甩干，用洗液250μl /孔，洗板4－5次，每次間隔15-30s，用吸水紙拍干（拍干后未被**的氣泡可用干凈的槍
頭刺破）。
6、 每孔加入酶標記物100μl，蓋板膜蓋板后置25℃環(huán)境中反應30min。重復步驟5洗板。
7、顯色：每孔加入底物液A液50μl， 再加B液50μl，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境中避光顯色15min。
8、 測定：每孔加入終止液50μl，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，在5min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），
測定每孔OD值。
孔雀石綠試劑盒【結果判定】
結果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與孔雀石綠的含量成負相關。
1、粗略判定：
用樣本的平均吸光度值與標準值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設樣本1 的吸光度值為0.310，樣本2 的吸光度值為1.051，標準液吸光度值分別是：0ppb 為2.243； 0.05ppb 為1.816；0.15ppb 為1.415；0.45ppb 為0.74；1 .35ppb 為0.343；4 .05ppb 為0.155。則樣本1 的濃度范圍是1.35ppb～4.05ppb；樣本2的濃度范圍是0.15ppb～0.45ppb。乘以其對應的稀釋倍數(shù)即為樣本中孔雀石綠的實際含量。
2、定量判定：
所獲得的每個濃度標準溶液和樣本吸光度值的平均值（B）除以**個標準（0標準）的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。
B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml標準溶液的平均吸光度值
以標準品百分吸光率為縱坐標，以孔雀石綠標準品濃度（ng/ml）的半對數(shù)為橫坐標，繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數(shù)即為樣本中孔雀石綠實際濃度。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算，更便于大量樣品的準確、快速分析。
3、標準曲線：
B/B0 (%)
0.05 0.15 0.45 1.35 4.05
孔雀石綠(ppb) [μg/kg]
圖1：孔雀石綠檢測試劑盒的回歸曲線
4、再現(xiàn)性：
%CV
孔雀石綠 (ppb) [μg/kg]
圖2：孔雀石綠檢測試劑盒的精密度
由多個不同的實驗結果確定了精密度，圖2顯示出孔雀石綠檢測試劑盒的精密度情況，獲得的標準吸收值的變異系數(shù)（%CV）對相應孔雀石綠濃度作曲線，可以看到在全部范圍內(nèi)變異系數(shù)如此之低，可以得到很好的再現(xiàn)性。
【注意事項】
1、 使用前將所有試劑溫度回升至室溫20-25℃。試劑及標本沒有回到室溫（20-25℃）會導致所有標準的OD值偏低。
2、 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會伴隨著出現(xiàn)標準曲線不成線性，重復性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應立即進行下
一步操作。
3、 混合要均勻，否則會出現(xiàn)重復性不好的現(xiàn)象。
4、 反應終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
5、 不要使用過了有效日期的試劑盒，稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD值的變化。不要交換使用不同批號的盒中試劑。
6、 不用的微孔板放進自封袋密封；標準物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
7、 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應當棄之。0標準的吸光度值小于0.5個單位（A450nm< 0.5 ）時，表示試劑可能變質(zhì)。
8、 該試劑盒*佳反應溫度為25℃，溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。
【儲存】
原包裝應儲存于2～8℃保鮮冷藏，切勿冷凍。
【有效期】
有效期12個月;生產(chǎn)日期、有效期、生產(chǎn)批號見外包裝。
- 溫馨提示：為規(guī)避購買風險，建議您在購買前務必確認供應商資質(zhì)與產(chǎn)品質(zhì)量。
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