喹乙醇原藥試劑盒

【產(chǎn)品簡介】

喹乙醇又稱喹酰胺醇，商品名為倍育諾、快育靈，由于喹乙醇有中度至明顯的蓄積毒性，對大多數(shù)動物有明顯的致畸作用，對人也有致畸形，致突變，致癌，因此喹乙醇在美國和歐盟都被禁止用作飼料添加劑。《中國獸藥典》(2005 版)明確規(guī)定，喹乙醇被禁止用于家禽及水產(chǎn)養(yǎng)殖。本喹乙醇快速檢測試劑盒具有方便、快速、靈敏等特點，適用于動物組織（水產(chǎn)、雞、豬、牛）、飼料等大批量樣品中的喹乙醇快速檢測。

喹乙醇原藥試劑盒【測定原理】

本試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測等樣本中的喹乙醇，在微孔條上預(yù)包被上偶聯(lián)抗原，利用抗原與抗體的特異性**化學(xué)反應(yīng)的原理來進(jìn)行的，樣本中的喹乙醇和微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗喹乙醇抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣品中的喹乙醇含量與樣品的吸光度值呈反比，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出喹乙醇含量。

【試劑盒技術(shù)指標(biāo)】  

規(guī)       格：96孔/盒

靈 敏 度： 0.05ppb

檢測時間： 75min

樣本檢測下限：

組    織………………………………15ppb

飼    料………………………………30ppb

交叉反應(yīng)率：

喹乙醇……………………………… 100%

卡巴多………………………………﹤0.1%

回收率：

組    織………………………………80%±15%

飼    料………………………………70%±15%

喹乙醇原藥試劑盒【試劑盒組成】  

1、     微量測試孔：1×96孔板（12條×8孔）

2、     1ppm標(biāo)準(zhǔn)品濃縮液1瓶：   1ml/瓶

3、     酶標(biāo)記物  12ml…………………紅色帽

4、     抗體工作液 7ml…………………綠色帽

5、     底物A液   7 ml…………………白色帽

6、     底物B液   7 ml…………………黑色帽

7、     終止液        7 ml…………………黃色帽

8、    20X濃縮洗滌液  40 ml…………透明帽

9、 5X濃縮復(fù)溶液      50 ml…………藍(lán)色帽

【所用儀器、試劑】  

具備的儀器：微孔酶標(biāo)儀、氮氣吹干裝置、打印機(jī)、均質(zhì)器 、振蕩器、離心機(jī)、恒溫箱、天平（感量0.01g）、刻度移液管

微量移液器：單道20μl-200μl、100μl-1000μl、多道250μl

試           劑：甲醇、正己烷、去離子水（蒸餾水）

喹乙醇原藥試劑盒【樣本前處理步驟】

樣本處理前須知

處理任何樣本時，都必須注意：

1、實驗中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時要更換吸頭。

2、實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時可對實驗器具進(jìn)行清潔，以避免污染干擾實驗結(jié)果。

樣本前處理需配制：

配液1、將5X濃縮復(fù)溶液用去離子水按照1：4稀釋（1份濃縮復(fù)溶液+4份去離子水）用于樣品稀釋和標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液的配制。

配液2、樣品提取液配制

              取1ml甲醇與9ml去離子水混勻。( 1份甲醇+9份去離子水）

（a）組織（豬肝、豬肉、魚、蝦等）樣本的處理方法

1、稱1±0.05g均質(zhì)后組織樣本于50ml離心管中，加入5ml樣品提取液充分混合30s,混勻,放置56度水浴10min；振蕩2min；室溫

     4000r/min以上離心10min。

2、取出上清液1ml于離心管中，加入1 ml正己烷充分混合30s；室溫4000r/min以上離心5min。

3、取50 μl下層溶液與樣品稀釋液950ul 充分混合30s取50μl進(jìn)行分析。

樣本稀釋倍數(shù)：100

（b）飼料樣品的處理方法

1、將飼料樣品研碎，稱1.0±0.05g研碎的飼料樣品，加入10ml樣品提取液配制，充分混合30s,放置56度水浴10min,劇烈震蕩2min，；室溫4000r/min以上離心10min。

2、取出上清液50ul與樣本稀釋液950ul 充分混合30s

3、取50ul上清進(jìn)行分析。

        樣本稀釋倍數(shù):200

【酶標(biāo)**分析程序】

1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置室溫（20-25℃平衡30min以上, 注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

2、配制標(biāo)準(zhǔn)液

   制備喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液：

     取一定量的1ppm標(biāo)準(zhǔn)品濃縮液,用樣品稀釋液并混合均勻，現(xiàn)配現(xiàn)用。

標(biāo)準(zhǔn)液6：配制4.05ppb---4ul標(biāo)準(zhǔn)品濃縮液（1ppm）加980ul樣品稀釋液混勻；

標(biāo)準(zhǔn)液5：配制1.35ppb---300ul標(biāo)準(zhǔn)液6加600ul樣品稀釋液混勻；    

標(biāo)準(zhǔn)液4：配制0.45ppb ----300ul標(biāo)準(zhǔn)液5加600ul樣品稀釋液混勻；    

標(biāo)準(zhǔn)液3：配制0.15ppb ----300ul標(biāo)準(zhǔn)液4加600ul樣品稀釋液混勻；     

標(biāo)準(zhǔn)液2：配制0.05ppb ----300ul標(biāo)準(zhǔn)液3加600ul樣品稀釋液混勻；     

標(biāo)準(zhǔn)液1：配制0 ppb----直接用樣品稀釋液；

3、按需要取出微孔條及板架，將不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。

4、配液：將40ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水按照1：19稀釋（1份濃縮洗滌液+19份去離子水）或按所需用量配制洗滌液。

5、編號：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號，每個樣品和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

6、加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50μl/孔到各自的微孔中，再加入50μl/孔的抗體工作液，用蓋板膜蓋板，輕輕振蕩混勻，37℃環(huán)境反應(yīng)30min 。

7、取出微孔板，甩出孔內(nèi)液體，用洗滌液按250μl /孔洗板4-5次，每次浸泡15-30秒，用吸水紙拍干（拍干后未**的氣泡可用干凈

     的吸頭刺破）。

8、每孔加入酶標(biāo)記物100μl/孔，用蓋板膜蓋板后，37℃ 環(huán)境中反應(yīng)30min。取出酶標(biāo)板，如前述洗板5次。

9、顯色：先加入底物液A液50μl/孔，再加入底物B液50μl/孔，輕輕振蕩混勻，37℃環(huán)境中避光顯色反應(yīng)15min。

10、測定：每孔加入終止液50μl，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，在5min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），

       測定吸光度值（OD值）

喹乙醇原藥試劑盒【結(jié)果判定】

結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與其所含喹乙醇的含量成負(fù)相關(guān)。

1、  粗略判定：

用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ppb)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.250，樣本2的吸光度值為0.720，標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是：0ppb為1.610；0.05ppb為1.380；0.15ppb為1.100；0.45ppb為0.620；1.35ppb為0.289；4.05ppb為0.108。則樣本1的濃度范圍是1.35ppb-4.05ppb； 樣本2的濃度范圍是0.15 ppb-0.45 ppb。乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中喹乙醇實際濃度。

2、定量分析：

所獲得的每個濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的平均值（B）除以**個標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值（B₀）再乘以100%，即百分吸光度值。

B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

B₀—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ng/ml）的半對數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中喹乙醇實際濃度。

若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計算，更便于大量樣品的準(zhǔn)確、快速分析。

3、標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)曲線：

B/B0 (%)

0.05     0.15      0.45       1.35      4.05

Olaquindox (ppb) [μg/kg]

            圖1：喹乙醇檢測試劑盒的回歸曲線

4、再現(xiàn)性：

    %CV

Olaquindox (ppb) [μg/kg]

      圖2：喹乙醇檢測試劑盒的精密度

由多個不同的實驗結(jié)果確定了精密度，圖2顯示出喹乙醇檢測試劑盒的精密度情況，獲得的標(biāo)準(zhǔn)吸收值的變異系數(shù)（%CV）對相應(yīng)喹乙醇濃度作曲線，可以看到在全部范圍內(nèi)變異系數(shù)如此之低，可以得到很好的再現(xiàn)性。

【注意事項】

1、使用前將所有試劑溫度回升至室溫20-25℃。試劑及標(biāo)本沒有回到室溫（20-25℃）會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。

2、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會伴隨著出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下

     一步操作。

3、 混合要均勻，否則會出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。

4、 反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。

5、 不要使用過了有效日期的試劑盒，稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD值的變化。不要交換使用不同批號的盒中試劑。

6、 不用的微孔板放進(jìn)自封袋密封；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。

7、 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個單位（A_450nm< 0.5 ）時，表示試劑可能變質(zhì)。

8、 該試劑盒*佳反應(yīng)溫度為37℃，溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

【儲存】

 原包裝應(yīng)儲存于2～8℃保鮮冷藏，切勿冷凍。

【有效期】

 有效期12個月;生產(chǎn)日期、有效期、生產(chǎn)批號見外包裝。

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