豬細小抗體試劑盒

【產品名稱】

通用名：豬細小病毒IgG抗體檢測試劑盒（酶聯**法）                                        

英文名：Diagnostic Kit for Antibodies to Porcine parvovirus (ELISA)

豬細小抗體試劑盒【包裝規格】 96T/盒

【預期用途】

       本試劑盒用于檢測豬血清中豬細小病毒抗體。評估豬場豬細小病毒疫苗**狀況，感染豬的血清學診斷。

【原    理】

      本試劑盒系由預包被豬細小病毒（PPV）抗原的微孔板和酶標記二抗及其他配套試劑組成，應用酶聯**法（ELISA）原理檢測豬血清或血漿中豬細小病毒特異性抗體。實驗時，在包被板中加入對照血清和稀釋的待檢血清，經溫育后，若樣品中含有豬細小病毒的特異性抗體，則將與包被板上抗原結合，經洗滌除去未結合的抗體和其他成分后；再加入酶標二抗，與包被板上抗原抗體復合物發生特異性結合；再經洗滌除去未結合的酶結合物，在孔中加TMB底物液，與酶反應形成藍色產物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關；加入終止液終止反應后，產物變為黃色；用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值，即可知樣品是否含有特異性抗體。

【試劑盒組成】

豬細小抗體試劑盒【樣品制備】

  取動物全血，按常規方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品短期可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。

【樣品稀釋】  

  用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋（如5μl血清加入195μl樣品稀釋液中，混勻）。陰、陽性對照不用稀釋。

【洗滌液配制】

 濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫（25℃左右），并搖動使沉淀的鹽溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。

豬細小抗體試劑盒【試驗操作方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復至??溫。

2.取所需用量包被微孔板條，設空白、陰性及陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

3.陰性、陽性對照孔分別加入陰性、陽性對照血清100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的血清樣本100μl；空白對照孔不加。

4.混勻，置37℃反應30分鐘。

5.扣去孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，重復洗滌5次，拍干。

6.每孔加酶標記物100μl（空白孔除外）。置37℃反應30分鐘。

7.洗滌，同步驟5。

8.每孔依次加顯色劑A、顯色劑B各50μl，混勻，37℃避光反應10分鐘。

9.每孔加終止液50μl，混勻，用空白孔調零，于450nm(630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A450）。

【結果判定】

定義：N=陰性對照孔平均A值；P=陽性對照孔平均A值；S=樣品孔A值；S/P=樣品孔A值/陽性對照孔平均A值。

1.正常情況下P/N≥2.1即試驗成立；否則不成立。

2.S/P≥0.4時判為陽性，S/P＜0.3時判為陰性，0.3≤S/P＜0.4時判為可疑。

當本實驗結果為陰性或可疑時表明豬抗體水平不足，建議補打相應疫苗。

【試驗方法的局限性】

 該試驗僅作為定性檢測豬細小病毒IgG抗體。

豬細小抗體試劑盒【注意事項】

1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣，嚴格健全和執行**隔離制度，各種實驗廢棄物都應按傳染物處理。

2.終止液具有腐蝕性，應避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。

3.微孔板從冷藏環境中取出時應恢復至室溫方可開袋，未用完的微孔板需放入有干燥劑的密封袋中保存(包被板開封后請于2～8℃避光

  保存，使用期限為1個月)

4.濃縮洗滌液在低溫時容易結晶，使用時需恢復至室溫以完全溶解。

5.洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。

6.用于檢測的樣品應保持新鮮。

7.試驗結果的判定必須以酶標儀讀數為準。

8.不同批號試劑組分不得混用。

【儲  存】

 原包裝應儲存于2～8℃保鮮冷藏，切勿冷凍。

【有效期】

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