雞傳染性****病毒抗體檢測試劑盒（酶聯**法）使用說明書
【產品名稱】
通用名：雞傳染性****病毒抗體檢測試劑盒（酶聯**法）
英文名：Test Kit for Antibodies to Infectious Bronchitis Virus (ELISA)
【包裝規格】 96T×1/盒、96T×2/盒
【預期用途】 雞傳染性****是由傳染性****病毒（Infectious Bronchitis Virus，IBV）引起雞的一種急性、高度接觸傳染性呼吸道傳染病，本病呈世界性分布，是嚴重危害養禽業的*主要疫病之一。疫苗**是預防和控制雞傳染性****發生的*有效途徑，而**后抗體水平的高低反映實際的疫苗**效果，直接關系到**雞群對禽流感病毒的抵抗力。
本試劑盒適用于：雞血清抗體的檢測，以確定被檢雞是否感染過雞傳染性****病毒或**雞體內抗體水平；評估雞群感染IBV的風險程度；了解雛雞母源抗體水平，為IBV**程序的制定提供參考。
雞傳染性****病毒抗體檢測試劑盒（酶聯**法）【原 理】
本試劑盒系由預包被雞傳染性****病毒重組N蛋白的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成，應用酶聯**法（ELISA）原理檢測雞血清或血漿中雞傳染性****病毒抗體。實驗時，在酶標板中加入對照血清和稀釋的待檢血清，經溫育后，若樣品中含有雞傳染性****病毒的抗體，則將與酶標板上抗原結合，經洗滌除去未結合的抗體和其他成分后；再加入酶標記物，與酶標板上抗原抗體復合物發生特異性結合；再經洗滌除去未結合的酶結合物，在孔中加TMB底物液，與酶反應形成藍色產物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關；加入終止液終止反應后，產物變為黃色；用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值，即可知樣品是否含有傳染性****病毒抗體。
【試劑盒組成】
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序號
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名稱
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規格（96T×1）
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規格（96T×2）
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1.
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酶標板
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96T×1
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96T×2
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2.
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酶標記物 (紅蓋)
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11ml×1
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11ml×2
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3.
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樣品稀釋液 (黃蓋)
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50ml×1
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50ml×1
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4.
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20X濃縮洗滌液
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40ml×1
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40ml×1
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5.
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底物液A (白蓋)
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6ml×1
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11ml×1
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6.
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底物液B (黑蓋)
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6ml×1
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11ml×1
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7.
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終止液 (黃蓋)
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6ml×1
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11ml×1
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8.
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陽性對照 (紅蓋)
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1.0 ml×1
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1.5 ml×1
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9.
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陰性對照 (綠蓋)
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1.0 ml×1
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1.5 ml×1
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10.
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蓋板膜
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1張
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2張
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11.
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自封袋
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1個
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1個
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12.
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說明書
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1份
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1份
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雞傳染性****病毒抗體檢測試劑盒（酶聯**法）【儲存及有效期】 于2～8℃避光保存，有效期為12個月。
包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個月。
【適用儀器】 含450nm、630nm波長的酶標儀，37℃恒溫設備，可調微量移液器。
【樣品準備】
1.取動物全血按常規方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品1周內可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。
2.用樣品稀釋液將待檢血清按100倍稀釋（如2μl血清加入198μl樣品稀釋液中，混勻）。陰、陽性對照不用稀釋。
3.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。
【檢驗方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復至室溫。
2.取所需用量酶標板條，設空白對照1孔、陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。
3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl；陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。
4.混勻，置37℃反應30分鐘。
5.扣去孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，重復洗滌5次，拍干。
6.每孔加酶標記物100μl（空白孔除外）。置37℃反應30分鐘。
7.洗滌，同步驟5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，37℃避光反應10分鐘。
9.每孔加終止液50μl，混勻，用空白孔調零，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）。
【參考值】 實驗正常的情況下，陰性對照≤0.10，陽性對照≥0.6。
雞傳染性****病毒抗體檢測試劑盒（酶聯**法）【檢驗結果的解釋】
1.C.O（臨界值）=0.13+陰性對照孔均值（陰性對照孔均值低于0.07時以0.07計算）。
2.未曾**雞群：樣品A值≥C.O為陽性；樣品A值＜C.O為陰性。
3.**雞群：監測并記錄樣本當時的抗體水平，根據結果分析抗體水平的分布及雞群**狀態的動向。
【試驗方法的局限性】
該試驗僅作為定性檢測雞血清或血漿中雞傳染性****病毒IgG抗體，根據A值高低可作抗體水平強、中、弱的粗略評估。
雞傳染性****病毒抗體檢測試劑盒（酶聯**法）【注意事項】
1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣，嚴格健全和執行**隔離制度，各種實驗廢棄物都應按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性，應避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。
3.酶標板從冷藏環境中取出時應恢復至室溫方可開袋，未用完的酶標板需放入有干燥劑的密封袋中保存。
4.濃縮洗滌液在低溫時容易結晶，使用時需恢復至室溫以完全溶解。
5.洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。
6.用于檢測的樣品應保持新鮮。
7.試驗結果的判定必須以酶標儀讀數為準。
8.不同批號試劑組分不得混用。
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