Tris-蘋果酸緩沖液技術服務
一、實驗原理
類似于DNA的體內(nèi)復制。首先待擴增DNA模板加熱變性解鏈，隨之將反應混合物冷卻至某一溫度，這一溫度可使引物與它的靶序列發(fā)生退火，再將溫度升高使退火引物在DNA聚合酶作用下得以延伸。Tris-蘋果酸緩沖液這種熱變性-復性-延伸的過程就是一個PCR循環(huán)，PCR就是在合適條件下的這種循環(huán)的不斷重復。
二、實驗步驟
PCR擴增
Tris-蘋果酸緩沖液根據(jù)客戶的實驗目的，進行PCR反應的優(yōu)化。
1、變性：高溫使雙鏈DNA解離形成單鏈（94℃，30s）。
2、退火：低溫下，引物與模板DNA互補區(qū)結合（55℃，30s）。
3、延伸：中溫延伸。DNA聚合酶催化以引物為起始點的DNA鏈延伸反應（70～72℃，30～60s）。
Tris-蘋果酸緩沖液以上述三個步驟為一個循環(huán)，每一循環(huán)的產(chǎn)物均可作為下一個循環(huán)的模板，經(jīng)過n次循環(huán)后，目的DNA以2n的形式增加。
三、樣品準備
1、模板制備
客戶提供PCR所需模板（質粒、基因組DNA、PCR產(chǎn)物等），或者提供樣品，我們制備模板。
2、引物設計
Tris-蘋果酸緩沖液客戶提供上、下游引物，或者提供目的基因的相關信息（基因序列、Genebank accession number擴增產(chǎn)物的用途等），我公司提供免費的引物設計及合成。