柱式昆蟲RNAout
柱式昆蟲RNAout低于1.7,考慮RNA降解,*常見的原因是RNA酶去除不徹底。
建議你1.EP管和tip用DEPC水泡,如果來不及也可以買現成的。
2.提取時注意低溫,防止RNA降解。
3.洗滌用的75%酒精用DEPC水配制,*后融解RNA的水也應是DEPC水,或去RNA酶水。
4.提取的RNA盡快轉錄成cDNA,-70度保存時間不宜過長(一般不超過一個月)。
柱式昆蟲RNAout提RNA提取秘訣:
1.提取RNA過程應該盡量快,不要太過仔細,以減少RNA的降解
2.在吸取上清液時要小心,離心管盡量不要抖動和傾斜,保持其從離心機里拿出來的角度吸取,加入異丙醇的那一步要尤其小心,上清液不要貪多
3.柱式昆蟲RNAout干燥時不要太過
4.你跑的電泳是不是普通的瓊脂糖凝膠電泳?這個結果不是很準確,因為在跑膠的過程當中RNA也會降解,但并不一定你提取的RNA效果不好,一般情況下跑出來的電泳結果有3條帶,2000bp,1000bp,100多的位置各有一條帶,分別是28s,18s,5s,如果5S很亮,表示RNA降解
5.提完的RNA可以做反轉錄,柱式昆蟲RNAout然后用管家基因檢測,只要能擴出明亮的條帶即對你的實驗沒有影響。注意:在用管家基因檢測時應增加循環數,以檢測是否有DNA污染。
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