產(chǎn)品特點：

1、公司產(chǎn)品僅用于科研不需要單獨純化線粒體，柱式法純化，操作簡單快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107個動物細(xì)胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本產(chǎn)品只適合于動物材料，不適合于植物材料，因為植物線粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。

操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

產(chǎn)品組成:

下列是公司正熱銷的產(chǎn)品：

定量檢測試劑盒葉酸測定培養(yǎng)基雞N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)Elisa測定試劑盒

細(xì)胞冠狀病毒3C類蛋白酶（SARS -CoV 3C-like PROTEASE）活性20次泛酸測定培養(yǎng)基雞神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）Elisa測定試劑盒

熒光淬滅法定量檢測試劑盒游離生物素測定培養(yǎng)基兔半胱氨酸蛋白酶抑制劑/胱抑素C（Cys-C）Elisa測定試劑盒

組織冠狀病毒3C類蛋白酶（SARS -CoV 3C-like PROTEASE）活性20次氣單胞菌培養(yǎng)基基礎(chǔ)芳香化酶/色素P450/P450抗體流式組化

熒光淬滅法定量檢測試劑盒醋酸鹽鑒別瓊脂人瘤病16型E7抗體流式組化

細(xì)胞艾滋病毒1蛋白酶（HIV-1 PROTEASE）活性熒光淬滅法20次氣單胞菌培養(yǎng)基添加劑原癌基因H-ras抗體流式組化

定量檢測試劑盒支原體培養(yǎng)基基礎(chǔ)敏感脂肪酸抗體流式組化

組織艾滋病毒1蛋白酶（HIV-1 PROTEASE）活性熒光淬滅法20次胰蛋白胨大豆瓊脂蛋白激酶N2抗體流式組化

定量檢測試劑盒布氏菌選擇性培養(yǎng)基受體相關(guān)蛋白16抗體流式組化

細(xì)胞切割酶/β分泌酶（MENAPSIN 2；β－SECRETASE）活性20次改良rv培養(yǎng)基D-脯氨酸

熒光淬滅法定量檢測試劑盒類桿菌-膽汁-七葉甙（BBE）瓊脂鏈霉蛋白酶

組織切割酶/β分泌酶（MENAPSIN 2；β－SECRETASE）活性20次BCYE 瓊脂(Legionella 瓊脂)5′-核苷酸酶

熒光淬滅法定量檢測試劑盒發(fā)酵蛋白胨                           牛血清白蛋白（第五組份）

細(xì)胞蛋白酶（PROTEASE）活性比色法定量檢測試劑盒20次其它菌檢測培養(yǎng)基鹽酸林可霉素

組織蛋白酶（PROTEASE）活性比色法定量檢測試劑盒20次BIGGY 瓊脂硫酸巴龍霉素
禽流感病毒H5/H7亞型(AIV-H5/H7)檢測試劑盒(雙重?zé)晒?PCR法)MMP-9/Gelatinase B ELISA Kit  大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶9/明膠酶B1，2-環(huán)己二 99%

TIMP-1 ELISA Kit  大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1四氧化鋨 AR,99.95%

bFGF ELISA Kit  大鼠堿性成纖維生長因子PLA300-T2（二層單扶手車板式 ）靜音推車 910(L)×600(W)mm 上層

MIP-5 ELISA Kit  大鼠巨噬炎癥蛋白5小推車 單層四輪 長70cm  寬 48cm  高 85cm

sICAM-1 ELISA Kit  大鼠可溶性間粘附分子1S-聯(lián)萘酚 99%

sVCAM-1 ELISA Kit  大鼠可溶性血管粘附分子1(R)-(-)-聯(lián)萘酚磷酸酯 98%

IgA ELISA Kit  大鼠球蛋白AR-1,1'-聯(lián)-2-萘酚 99%

IgE ELISA Kit  大鼠球蛋白E(S)-(+)-聯(lián)萘酚磷酸酯 97%

使用方法:

一:培養(yǎng)細(xì)胞預(yù)處理

1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個培養(yǎng)細(xì)胞,離心收集后棄上清。

2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細(xì)胞兩次,離心得到的細(xì)胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:組織細(xì)胞預(yù)處理

3. 用剪刀將1g新鮮的動物組織剪碎(芝麻大小*),轉(zhuǎn)移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動物組織,因為凍凝過程中形成的冰晶會將線粒體刺破,使其DNA釋放出來被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。

三:血液預(yù)處理

4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細(xì)胞層。

5. 用自備PBS洗滌白細(xì)胞兩次,得到的白細(xì)胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式動物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級)四:mtDNA提取

5.在細(xì)胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續(xù)下步操作。

6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復(fù)顛倒混勻10次。千萬不要劇烈振蕩。

7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過8分鐘。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見白色沉淀物產(chǎn)生,然后放冰上放置20-25分鐘。

9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。由于此時的溶液比重較大,有時候出現(xiàn)沉淀漂浮是正常現(xiàn)象,取上清時避開漂浮的沉淀即可。

10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結(jié)合,此步十分重要。

11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會揮發(fā)。

13. 重復(fù)上步1次。

14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會影響DNA的后續(xù)使用(如DNA上樣時不能沉淀到加樣孔中)。

15. 將離心吸附柱置于一個新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預(yù)熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產(chǎn)量稍微有所降低。

16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司離心吸附柱結(jié)合DNA能力較強(qiáng),如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當(dāng)于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來洗脫。

18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個動物細(xì)胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。

19. 由于DNA機(jī)械斷裂,電泳時DNA可能不呈現(xiàn)專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。

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