操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

產品特點：

1、公司產品僅用于科研不需要單獨純化線粒體，柱式法純化，操作簡單快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本產品只適合于動物材料，不適合于植物材料，因為植物線粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。

產品組成:

使用方法:

一:培養細胞預處理

1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個培養細胞,離心收集后棄上清。

2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細胞兩次,離心得到的細胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:組織細胞預處理

3. 用剪刀將1g新鮮的動物組織剪碎(芝麻大小*),轉移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動物組織,因為凍凝過程中形成的冰晶會將線粒體刺破,使其DNA釋放出來被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。

三:血液預處理

4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細胞層。

5. 用自備PBS洗滌白細胞兩次,得到的白細胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式動物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級)四:mtDNA提取

5.在細胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續下步操作。

6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復顛倒混勻10次。千萬不要劇烈振蕩。

7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過8分鐘。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見白色沉淀物產生,然后放冰上放置20-25分鐘。

9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉移到離心吸附柱中。由于此時的溶液比重較大,有時候出現沉淀漂浮是正常現象,取上清時避開漂浮的沉淀即可。

10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結合,此步十分重要。

11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會揮發。

13. 重復上步1次。

14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會影響DNA的后續使用(如DNA上樣時不能沉淀到加樣孔中)。

15. 將離心吸附柱置于一個新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產量稍微有所降低。

16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司離心吸附柱結合DNA能力較強,如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來洗脫。

18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。

19. 由于DNA機械斷裂,電泳時DNA可能不呈現專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正熱銷的產品：
高質敏感比色法定量檢測試劑盒葡萄糖肉浸液肉湯    人包蟲抗體IgG Elisa測定試劑盒

組織NADPH細胞色素C還原酶（NADPH Cytochrome C Reductase）活性20次匹克     匹克氏肉湯基礎A  石斛LAMP鑒定試劑盒

高質敏感比色法定量檢測試劑盒肉浸液肉湯培養基  鴉膽子LAMP鑒定試劑盒

β-葡萄糖醛酸酶（β-glucuronidase）活性比色法定量檢測試劑盒20次疊氮鈉葡萄糖肉湯  地榆LAMP鑒定試劑盒

羧酸酯酶（carboxylesterase）活性比色法定量檢測試劑盒20次KF鏈球菌瓊脂  人神經特異性烯醇化酶(NSE)Elisa測定試劑盒

細胞谷氨酰半胱氨酸合成酶（glutamyl systeine synthetase）活性比色法定量檢測試劑盒20次LIM培養基柿蒂探針法PCR鑒定試劑盒

組織谷氨酰半胱氨酸合成酶（glutamyl systeine synthetase）活性比色法定量檢測試劑盒20次BETA-SSA 瓊脂小茴香探針法PCR鑒定試

植物谷氨酰半胱氨酸合成酶（glutamyl systeine synthetase）活性比色法定量檢測試劑盒20次小腸結腸炎耶爾森氏菌人凝血因子Ⅸ(FⅨ)Elisa測定試劑盒

植物硝酸鹽還原酶活性比色法定量檢測試劑盒20次改良Y培養基   制何首烏染料法PCR鑒定試劑盒

/酵母細胞硝酸鹽還原酶活性比色法定量檢測試劑盒20次改良磷酸鹽緩沖液PSB  枳實染料法PCR鑒定試劑盒

藻類細胞硝酸鹽還原酶活性比色法定量檢測試劑盒20次ITC 肉湯小鼠白介素16(IL-16)Elisa測定試劑盒

植物亞硝酸鹽還原酶總活性比色法定量檢測試劑盒20次CIN-1I培養基基礎    小鼠纖溶酶抗纖溶酶復合物(PAP)Elisa測定試劑盒

/酵母細胞亞硝酸鹽還原酶總活性比色法定量檢測試劑盒20次消效果評價大鼠巨噬炎癥蛋白5(MIP-5)Elisa測定試劑盒

藻類細胞亞硝酸鹽還原酶總活性比色法定量檢測試劑盒20次營養肉湯（NB）大鼠β素(BTC)Elisa測定試劑盒

植物鐵型亞硝酸鹽還原酶活性比色法定量檢測試劑盒20次營養瓊脂（NA）大鼠血管生長素(ANG)Elisa測定試劑盒
豬圓環病毒1型/2型(PCV-1/PCV-2)檢測試劑盒(雙重熒光-PCR法)Cyclin-D2 ELISA Kit  大鼠周期素D2N,N,N',N'-四甲基-1,3-二 99%

Cyclin-D1 ELISA Kit  大鼠周期素D1N,N,N',N'-四甲基-1,3-二 97%

MBP ELISA Kit  大鼠髓磷脂堿性蛋白酸銨 99%

AFP ELISA Kit  大鼠甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白化銨 AR,99.0%

PAP ELISA Kit  大鼠前列腺酸性磷酸酶化銨 99.999% metals basis

fPSA ELISA Kit  大鼠游離前列腺特異性抗原化鉍 98%

PSA ELISA Kit  大鼠前列腺特異性抗原代仲丁烷 97%

大鼠卵巢癌標志物CA125ELISA Kit  大鼠卵巢癌標志物CA125酸鋇 一水合物 98%

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