產品特點：

1、公司產品僅用于科研不需要單獨純化線粒體，柱式法純化，操作簡單快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本產品只適合于動物材料，不適合于植物材料，因為植物線粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。

操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

產品組成:

下列是公司正熱銷的產品：

石蠟切片組織化學HRP酶聯DAB完全間接檢測試劑盒10次EE Broth Mossel溴化金

（含一抗和HRP二抗）RVS大豆肉湯人肺癌標志物DR-70（DR-70TM）ELISA試劑盒,DR-70TM ELISA kit

石蠟切片組織化學HRP酶聯DAB直接檢測試劑盒（含HRP一抗）10次RVS Soy Broth人乙酰肝素酶（HPA）ELISA試劑盒,HPA ELISA kit

石蠟切片組織化學AP酶聯NBT/BCIP基礎檢測試劑盒（無一抗和二抗）50次XLD瓊脂人抗存活素抗體/生存蛋白（Surv）ELISA試劑盒,Surv ELISA kit

石蠟切片組織化學AP酶聯NBT/BCIP間接檢測試劑盒（含AP二抗）20次XLD Agar人抗肌內膜抗體IgA（EMA IgA）ELISA試劑盒,EMA IgA ELISA

石蠟切片組織化學AP酶聯NBT/BCIP完全間接檢測試劑盒10次溴棕銨瓊脂人衣原體蛋白酶樣活性因子（CPAF）ELISA試劑盒, CPAF ELISA

（含一抗和AP二抗）Cetrimide Agar Base人流感病抗體IgG（FLU）ELISA試劑盒,FLU ELISA

石蠟切片組織化學AP酶聯NBT/BCIP直接檢測試劑盒（含AP一抗）10次甘露鹽瓊脂人雌受體（ER）ELISA試劑盒,ER ELISA

石蠟切片熒光顯微鏡基礎檢測試劑盒（無一抗和二抗）50次Mannitol Salt Agar人3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A合酶1（HMGCS1）ELISA試劑盒,HMGCS1 ELISA

石蠟切片熒光顯微鏡間接檢測試劑盒（含熒光二抗）20次梭菌強化培養基人磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PCK）ELISA試劑盒,

石蠟切片熒光顯微鏡完全間接檢測試劑盒（含一抗和熒光二抗）10次Reinforced Clostridial Medium人OJ抗體/抗異亮氨酰tRNA合成酶抗體（OJ/IleRS）ELISA試劑盒,

石蠟切片熒光顯微鏡直接檢測試劑盒（含熒光一抗）10次哥倫比亞瓊脂人維生素C（VC）ELISA試劑盒,

TEM電鏡石蠟切片組織化學HRP酶聯DAB基礎檢測試劑盒50次Columbia Agar人凝血酶抗凝血酶復合物（TAT）ELISA試劑盒,

（無一抗和二抗）沙氏葡萄糖肉湯人胰高血糖素樣肽1（GLP-1）ELISA試劑盒,

TEM電鏡石蠟切片組織化學HRP酶聯DAB間接檢測試劑盒（含HRP二抗）20次Sabouraud Dextrose Broth人皮膚蛋白（DPT）ELISA試劑盒,
白喉桿菌(CD)檢測試劑盒（熒光-PCR法）人高香草酸(HVA) ELISA Kit  人高香草酸乙 Standard for GC,>99.8%(GC)

人煙酰腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH) ELISA Kit  人煙酰腺嘌呤二核苷酸磷酸無水乙 藥用級，99.5%

CNR-1(Human cadherln-related neuronal receptor1) ELISA Kit  人鈣粘蛋白相關的神經受體1乙 光譜純, ≥99.8%

ATM(Human Ataxia angiectasia mutated) ELISA Kit  人擴張性共濟失調突變基因乙  電子級

AhR(Human aryl hydrocarbon receptor) ELISA Kit  人芳香烴受體乙 分析標準品，>99.9%(GC)

SMAF(Human Specifie Macrophage Arming Paetot) ELISA Kit  人特異性巨噬武裝因子乙 農殘級, ≥99.8%

MF/MPF(Human maturation promoting factor) ELISA Kit  人促有絲分裂因子乙 AR,99.7%

ATF-1(Human activating transcription factor-1) ELISA Kit  人轉錄因子抗體-1乙 CP，99.5%

使用方法:

一:培養細胞預處理

1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個培養細胞,離心收集后棄上清。

2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細胞兩次,離心得到的細胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:組織細胞預處理

3. 用剪刀將1g新鮮的動物組織剪碎(芝麻大小*),轉移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動物組織,因為凍凝過程中形成的冰晶會將線粒體刺破,使其DNA釋放出來被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。

三:血液預處理

4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細胞層。

5. 用自備PBS洗滌白細胞兩次,得到的白細胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式動物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級)四:mtDNA提取

5.在細胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續下步操作。

6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復顛倒混勻10次。千萬不要劇烈振蕩。

7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過8分鐘。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見白色沉淀物產生,然后放冰上放置20-25分鐘。

9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉移到離心吸附柱中。由于此時的溶液比重較大,有時候出現沉淀漂浮是正常現象,取上清時避開漂浮的沉淀即可。

10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結合,此步十分重要。

11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會揮發。

13. 重復上步1次。

14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會影響DNA的后續使用(如DNA上樣時不能沉淀到加樣孔中)。

15. 將離心吸附柱置于一個新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產量稍微有所降低。

16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司離心吸附柱結合DNA能力較強,如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來洗脫。

18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。

19. 由于DNA機械斷裂,電泳時DNA可能不呈現專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。

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