產(chǎn)品特點(diǎn)：

1、公司產(chǎn)品僅用于科研不需要單獨(dú)純化線粒體，柱式法純化，操作簡單快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107個動物細(xì)胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本產(chǎn)品只適合于動物材料，不適合于植物材料，因為植物線粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。

操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

產(chǎn)品組成:

下列是公司正熱銷的產(chǎn)品：

細(xì)胞熒光顯微鏡基礎(chǔ)檢測試劑盒（無一抗和二抗）50次緩沖蛋白胨水人γ肽（Pγ）ELISA試劑盒,Pγ ELISA kit

細(xì)胞熒光顯微鏡間接檢測試劑盒（含熒光二抗）20次Buffered Peptone Water Preenrichment人角蛋白20（CK20）ELISA試劑盒,CK20 ELISA kit

細(xì)胞熒光顯微鏡完全間接檢測試劑盒（含一抗和熒光二抗）10次Fluid Tetrathionate Medium人Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基末端肽（ⅠCTP）ELISA試劑盒,ⅠCTP ELISA kit

細(xì)胞熒光顯微鏡直接檢測試劑盒（含熒光一抗）10次RV R10肉湯人抗肝素PF4復(fù)合物抗體/HIT抗體（HIT）ELISA試劑盒,HIT ELISA

熒光細(xì)胞流式儀基礎(chǔ)檢測試劑盒（無一抗和二抗）50次Rappaport-Vassiliadis R10 Broth人流行性乙型腦炎抗體IgG（JE IgG）ELISA試劑盒,JE IgG ELISA

熒光細(xì)胞流式儀間接檢測試劑盒（含熒光二抗）20次Fluid Selenite - Cystine Medium人25羥基維生素D3（25（OH）D3/25 HVD3）ELISA試劑盒,

熒光細(xì)胞流式儀完全間接檢測試劑盒（含一抗和熒光二抗）10次Bismuth Sulfite Agar人吡哆醛/吡哆醇維生素B6磷酸酶（PDXP）ELISA試劑盒,PDXP ELISA

熒光細(xì)胞流式儀直接檢測試劑盒（含熒光一抗）10次亮綠瓊脂人葡萄糖6磷酸異構(gòu)酶（GPI）ELISA試劑盒,

細(xì)胞化學(xué)HRP酶聯(lián)DAB基礎(chǔ)檢測試劑盒（無一抗和二抗）50次Brilliant Green Agar人帕金森氏病2Parkin（Park2）ELISA試劑盒,

細(xì)胞化學(xué)HRP酶聯(lián)DAB間接檢測試劑盒（含HRP二抗）20次HE瓊脂人皰疹抗體（HG）ELISA試劑盒,

細(xì)胞化學(xué)HRP酶聯(lián)DAB完全間接檢測試劑盒（含一抗和HRP二抗）10次Hektoen Enteric Agar人活化凝血因子Ⅻ（FⅫa）ELISA試劑盒,

細(xì)胞化學(xué)HRP酶聯(lián)DAB直接檢測試劑盒（含HRP一抗）10次CHROMagarTM沙門菌顯色培養(yǎng)基人主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類（MHCⅡ/HLA-Ⅱ）ELISA試劑盒,

細(xì)胞化學(xué)AP酶聯(lián)NBT/BCIP基礎(chǔ)檢測試劑盒（無一抗和二抗）50次CHROMagarTM Salmonella人血小板因子4（PF-4/CXCL4）ELISA試劑盒,

細(xì)胞化學(xué)AP酶聯(lián)NBT/BCIP間接檢測試劑盒（含AP二抗）20次三糖鐵瓊脂小鼠CD30分子（CD30）ELISA試劑盒,

細(xì)胞化學(xué)AP酶聯(lián)NBT/BCIP完全間接檢測試劑盒（含一抗和AP二抗）10次Triple Sugar Iron Agar大鼠抗紅抗體（RBC）ELISA試劑盒,
Q熱立克次（CB）體檢測試劑盒（熒光-PCR法）Human Protein S ELISA Kit  人蛋白S氧化鏑 ≥99.9% metals basis

sEPCR(Human soluble endothelial protein C receptor) ELISA Kit  人可溶性血管內(nèi)皮蛋白C受體氧化鉺 99.99%

C/EBP Epsilon (Human CCAAT/enhancer binding protein epsilon) ELISA Kit  人CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白ε氧化鉺 99.9% metals basis

C/EBP Delta(Human CCAAT/enhancer binding protein deta) ELISA Kit  人CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白δ氧化銪 99.9% metals basis

C/EBP Alpha(Human CCAAT/enhancer binding protein alpha) ELISA Kit  人CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白α氧化鈥 99.99% metals basis

2,3-DPG(Human 2,3-Disphosphoglycerate,2) ELISA Kit  人2,3-二磷酸甘油酸納米氧化鈥 99.9% metals basis,<100 nm particle size (BET)

LUM(Human lumican) ELISA Kit  人基膜聚糖/內(nèi)腔蛋白氧化镥  99.99% metals basis

NHE3(Human Na+/H+ exchanger 3) ELISA Kit  人Na+/H+交換體3碳酸鑭(III) 水合物 99%

使用方法:

一:培養(yǎng)細(xì)胞預(yù)處理

1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個培養(yǎng)細(xì)胞,離心收集后棄上清。

2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細(xì)胞兩次,離心得到的細(xì)胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:組織細(xì)胞預(yù)處理

3. 用剪刀將1g新鮮的動物組織剪碎(芝麻大小*),轉(zhuǎn)移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動物組織,因為凍凝過程中形成的冰晶會將線粒體刺破,使其DNA釋放出來被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。

三:血液預(yù)處理

4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細(xì)胞層。

5. 用自備PBS洗滌白細(xì)胞兩次,得到的白細(xì)胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式動物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級)四:mtDNA提取

5.在細(xì)胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續(xù)下步操作。

6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復(fù)顛倒混勻10次。千萬不要劇烈振蕩。

7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過8分鐘。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見白色沉淀物產(chǎn)生,然后放冰上放置20-25分鐘。

9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。由于此時的溶液比重較大,有時候出現(xiàn)沉淀漂浮是正常現(xiàn)象,取上清時避開漂浮的沉淀即可。

10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結(jié)合,此步十分重要。

11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會揮發(fā)。

13. 重復(fù)上步1次。

14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會影響DNA的后續(xù)使用(如DNA上樣時不能沉淀到加樣孔中)。

15. 將離心吸附柱置于一個新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預(yù)熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產(chǎn)量稍微有所降低。

16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司離心吸附柱結(jié)合DNA能力較強(qiáng),如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當(dāng)于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來洗脫。

18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個動物細(xì)胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。

19. 由于DNA機(jī)械斷裂,電泳時DNA可能不呈現(xiàn)專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。

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