操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。
產品特點：
1、公司產品僅用于科研不需要單獨純化線粒體，柱式法純化，操作簡單快捷。
2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。
3、每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。
注意：本產品只適合于動物材料，不適合于植物材料，因為植物線粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。
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產品名稱
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普氏立克次體（RP）檢測試劑盒（熒光-PCR法）
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規格
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50T
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貨號
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FS-01P99734
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產品組成:
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成分
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規格
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溶液A
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13ml
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溶液B
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13ml
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溶液C
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18ml
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離心吸附柱
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50套
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通用洗柱液
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50ml
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DNA洗脫液
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10ml
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說明書
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1份
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使用方法:
一:培養細胞預處理
1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個培養細胞,離心收集后棄上清。
2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細胞兩次,離心得到的細胞沉淀直接用于mtDNA提取。
二:組織細胞預處理
3. 用剪刀將1g新鮮的動物組織剪碎(芝麻大小*),轉移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動物組織,因為凍凝過程中形成的冰晶會將線粒體刺破,使其DNA釋放出來被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。
三:血液預處理
4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細胞層。
5. 用自備PBS洗滌白細胞兩次,得到的白細胞沉淀用于mtDNA提取。
柱式動物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級)四:mtDNA提取
5.在細胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續下步操作。
6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復顛倒混勻10次。千萬不要劇烈振蕩。
7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過8分鐘。
8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見白色沉淀物產生,然后放冰上放置20-25分鐘。
9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉移到離心吸附柱中。由于此時的溶液比重較大,有時候出現沉淀漂浮是正常現象,取上清時避開漂浮的沉淀即可。
10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結合,此步十分重要。
11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。
12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。
注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會揮發。
13. 重復上步1次。
14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會影響DNA的后續使用(如DNA上樣時不能沉淀到加樣孔中)。
15. 將離心吸附柱置于一個新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產量稍微有所降低。
16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。
17. 由于本公司離心吸附柱結合DNA能力較強,如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來洗脫。
18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。
19. 由于DNA機械斷裂,電泳時DNA可能不呈現專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正熱銷的產品：
IL-12 P35（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克Salmosyst broth base Salmosyst 肉湯基礎Oxford Agar Base（SN標準）
IL-12 P40（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克Salmosyst selective supplement tablets Salmosyst選擇添加片黨參炔苷 Lobetyolin
IL-13（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克Selective agar for pathogenic fungi致病選擇瓊脂2-deacetyl wilformine 2-deacetyl wilformine
IL-14（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克Selenite cystine enrichment btoth for microbiology2′-脫氧胸苷-5′-三磷酸三鈉鹽
IL-15（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克SIM medium SIM培養基羧甲基瓊脂糖凝膠CL-6B
IL-16（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克SIMMONS citrate agar simmons檸檬酸鹽瓊脂癸酸
IL-17（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克Sodium-chloride peptone broth(buffered) 蛋白胨肉湯（緩沖）人肝癌抗原（PHC）ELISA試劑盒,PHC ELISA kit
IL-18（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克Sorbitol-MacCONKEY agar(SMAC agar)SMAC瓊脂/山梨麥康凱瓊脂人癌基因蛋白質p190/bcr-abl ELISA試劑盒,
IL-19（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克SPS agar ANGELOTTI perfringens selective agar SPS瓊脂/ANGELOTTI人抗網硬蛋白抗體（ARA）ELISA試劑盒, RA ELISA kit
ERK 1（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克產氣莢膜菌選擇瓊脂梭人S100鈣結合蛋白A8/鈣粒蛋白A（S100A8）ELISA試劑盒,S100A8 ELISA K
ERK 2（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克SS agar Salmonella-Shigella agar SS瓊脂/沙門氏菌-志賀氏菌瓊脂人乙型肝炎表面抗原（HBsAg）ELISA試劑盒,HBsAg ELISA
ERK 3（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克SSDC agar(Salmonella-Shigella agar with sodium dexoycholate and calcium chloride) SSDC 瓊脂/沙門氏菌-志賀氏菌瓊脂（含脫氧膽鹽氯化鈣）人抗甲型肝炎病IgG抗體（anti-HAV）ELISA試劑盒, anti-HAV ELISA
ERK 5（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克Standard count agar標準計數瓊脂人軍團菌抗體IgA（LP Ab-IgA）ELISA試劑盒,LP Ab-IgA ELISA
ERK 6（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克Standard nutrient agar標準I營養瓊脂人單純皰疹病Ⅱ型抗體（HSVⅡ-Ab）ELISA試劑盒,HSVⅡ-Ab ELISA
GSK-3 Alpha（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克Standard nutrient broth 標準I營養瓊脂人D-乳酸脫氫酶（D-LDH） ELISA試劑盒,
普氏立克次體（RP）檢測試劑盒（熒光-PCR法）UGT2B4(Human uridine dipho-sphate glucuronosyltransferase 2 family polypeptide B4) ELISA Kit 人二磷酸尿核苷葡糖酸基轉移酶2家族肽B4氫化 98%
PPP1R1A(Human protein phosphatase 1 regulatory subunit A) ELISA Kit 人蛋白磷酸酶1調控/抑制因子亞基1A氫化鈉 98%
ABCG2(Human ATP-binding cassette transporter G2) ELISA Kit 人腺苷三磷酸結合盒轉運體G2吐溫80 CP
GDI(Human Guanine nucleotide dissociation Inhibitor) ELISA Kit 人鳥苷酸解離抑制因子吐溫80 藥用級
OTF2B(Human octamer transcription factor 2B) ELISA Kit 人八聚體轉錄因子金屬鎵 SP
OTF2A(Human octamer transcription factor 2A) ELISA Kit 人八聚體轉錄因子金屬鎵 99.999% metals basis
DUTP(Human deoxyuridinetriphate) ELISA Kit 人脫氧尿三磷酸金屬鎵 99.9999% metals basis
CMR(Human costimulatory molecules recptor) ELISA Kit 人協同激分子受體金屬鎵 99.99999% metals basis
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