操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

產品特點：

1、公司產品僅用于科研不需要單獨純化線粒體，柱式法純化，操作簡單快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本產品只適合于動物材料，不適合于植物材料，因為植物線粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。

產品組成:

使用方法:

一:培養細胞預處理

1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個培養細胞,離心收集后棄上清。

2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細胞兩次,離心得到的細胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:組織細胞預處理

3. 用剪刀將1g新鮮的動物組織剪碎(芝麻大小*),轉移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動物組織,因為凍凝過程中形成的冰晶會將線粒體刺破,使其DNA釋放出來被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。

三:血液預處理

4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細胞層。

5. 用自備PBS洗滌白細胞兩次,得到的白細胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式動物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級)四:mtDNA提取

5.在細胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續下步操作。

6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復顛倒混勻10次。千萬不要劇烈振蕩。

7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過8分鐘。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見白色沉淀物產生,然后放冰上放置20-25分鐘。

9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉移到離心吸附柱中。由于此時的溶液比重較大,有時候出現沉淀漂浮是正常現象,取上清時避開漂浮的沉淀即可。

10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結合,此步十分重要。

11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會揮發。

13. 重復上步1次。

14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會影響DNA的后續使用(如DNA上樣時不能沉淀到加樣孔中)。

15. 將離心吸附柱置于一個新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產量稍微有所降低。

16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司離心吸附柱結合DNA能力較強,如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來洗脫。

18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。

19. 由于DNA機械斷裂,電泳時DNA可能不呈現專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正熱銷的產品：
小鼠ERβ基因甲基化檢測試劑盒20次阻抑素(PHB)重組蛋白人層連蛋白/板層素（LN）ELISA試劑盒, LN ELISA kit

大鼠ERβ基因甲基化檢測試劑盒20次組織蛋白酶D(CTSD)重組蛋白人抗浦肯野抗體/抗Yo抗體（PCA-1/Yo）ELISA試劑盒, PCA-1/Yo ELISA

小鼠MLH1基因甲基化檢測試劑盒20次組織蛋白酶L(CTSL)重組蛋白人葡萄球菌蛋白A（SPA）ELISA試劑盒, SPA ELISA

小鼠c－fos基因甲基化檢測試劑盒20次組織金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP1)重組蛋白人單氧化酶（MAO）ELISA試劑盒,MAO ELISA

人體P14基因甲基化檢測試劑盒20次組織金屬蛋白酶抑制因子2(TIMP2)重組蛋白人二氫嘧啶酶樣2（DPYSL2）ELISA試劑盒,

人體SNCG基因甲基化檢測試劑盒20次組織金屬蛋白酶抑制因子3(TIMP3)重組蛋白人球蛋白重鏈可變區（IgHV）ELISA試劑盒,

人體hTERT基因甲基化檢測試劑盒20次組織金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP4)重組蛋白人SH2攜帶蛋白（SHC/SLP-76）ELISA試劑盒,

人體RASSF1A基因甲基化檢測試劑盒20次組織型纖溶酶原激活因子(tPA)重組蛋白人膠原凝集素（Collectin）ELISA試劑盒,

小鼠αACTIN基因甲基化檢測試劑盒20次組織因子(TF)重組蛋白大鼠白介素7（IL-7）ELISA試劑盒,

大鼠αACTIN基因甲基化檢測試劑盒20次組織因子通道抑制因子(TFPI)重組蛋白大鼠E選擇素（E-Selectin/CD62E）ELISA試劑盒,

小鼠PDGFβ基因甲基化檢測試劑盒20次Kovacs氏靛基質試劑豬傳染性胃腸炎病抗體（TGEV）ELISA試劑盒,

大鼠PDGFβ基因甲基化檢測試劑盒20次V-P甲、乙液試劑兔抗平滑肌抗體（ASMA） ELISA試劑盒,

人體IL-17基因甲基化檢測試劑盒20次1%亞碲酸溶液兔功能相關抗原3（LFA-3/CD58）ELISA試劑盒,

基因甲基化程度定量分析試劑盒20次亮綠瓊脂魚類狀腺原氨酸（T3）ELISA試劑盒,

數字化表觀基因組完全分析技術試劑盒5次平板計數瓊脂（PCA)抗乙型肝炎病核心IgM抗體（HBcAb-IgM）ELISA試劑盒--動物，人
沙門氏菌SPP-spec檢測試劑盒(熒光-PCR法)BACE2(Human beta-site APP-cleaving enzyme 2) ELISA Kit  人β位淀粉樣前體蛋白裂解酶2α-酮戊二酸 98%

UPP1(Human uridine phosphorylase 1) ELISA Kit  人尿嘧啶核苷磷酸化酶1α-糜蛋白酶 800 usp u/mg

ADH(Human alcohol dehydrogenase) ELISA Kit  人乙脫氫酶DNA酶 ≥2,000 Kunitz units/mg protein

RND1(Human Rho family GTPase 1) ELISA Kit  人Rho家族GTP酶1彈性蛋白酶 30 units/mg

RIPK2(Human receptor TNFRSF-interacting serine-threonine kinase 2) ELISA Kit  人受體TNFRSF結合絲氨酸蘇氨酸激酶2脂肪酶 10萬U/g

PLSCR1(Human phospholipid scramblase 1) ELISA KIT  人磷脂爬行酶1胰脂肪酶 牛胰腺，powder, 15-35 units/mg

HMGCS1(Human 3-hydroxy-3-methylglutaryl-Coenzyme A synthase 1) ELISA Kit  人3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A合酶1木瓜蛋白酶 ≥3 units/mg

EAR12(Human eosinophil-associated ribonuclease A family member 12) ELISA KIT  人嗜酸性白血球相關之RNA水解酵素家族成員12胰蛋白酶（牛胰臟） potency ≥2500 units/mg

產品留言

標題

聯系人

聯系電話

內容

驗證碼

點擊換一張

注：1.可以使用快捷鍵Alt+S或Ctrl+Enter發送信息!
2.如有必要,請您留下您的詳細聯系方式!