產品特點：

1、公司產品僅用于科研不需要單獨純化線粒體，柱式法純化，操作簡單快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本產品只適合于動物材料，不適合于植物材料，因為植物線粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。

操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

產品組成:

下列是公司正熱銷的產品：

細胞氯霉素乙酰基轉移酶（CAT）報告基因活性熒光定量檢測試劑盒20次脂蛋白脂酶(LIPD)重組蛋白茜素紫3B

組織氯霉素乙酰基轉移酶（CAT）報告基因活性熒光定量檢測試劑盒20次脂聯素(ADP)重組蛋白葡聚糖凝膠G-10

細胞氯霉素乙酰基轉移酶（CAT）報告基因活性熒光薄層色譜（TLC）檢測試劑盒20次脂聯素受體2(ADIPOR2)重組蛋白鉍粒

組織氯霉素乙酰基轉移酶（CAT）報告基因活性熒光薄層色譜（TLC）檢測試劑盒20次脂質轉運蛋白(CETP)重組蛋白人透明質酸（HA）ELISA試劑盒,HA ELISA kit

細胞分泌型堿性磷酸酶活性熒光定量檢測試劑盒20次中期因子(MK)重組蛋白人潑尼松龍（PS）ELISA試劑盒, PS ELISA

細胞分泌型堿性磷酸酶化學發光法定量檢測試劑盒20次中性粒彈性蛋白酶(ELA2)重組蛋白人牛小腸堿性磷酸酶（CIAP）ELISA試劑盒,

甲基化分析試劑專題中性粒激活蛋白3(NAP3)重組蛋白人基質金屬蛋白酶4（MMP-4）ELISA試劑盒,

名稱規格腫瘤蛋白p53(TP53)重組蛋白人β2微球蛋白（BMG/β2-MG）ELISA試劑盒,

通用型基因甲基化檢測試劑盒20次腫瘤壞死因子α誘導蛋白6(TNFαIP6)重組蛋白人ICE蛋白酶激活因子（IRAP）ELISA試劑盒,

基因甲基化特異性PCR擴增（MSP）試劑盒60次腫瘤壞死因子β(TNFβ)重組蛋白人α突觸核蛋白（α-SYN）ELISA試劑盒,

基因甲基化檢測DNA修飾試劑盒20次腫瘤壞死因子配體超家族成員14(TNFSF14)重組蛋白人重組激活基因1（RAG-1）ELISA試劑盒,

人體p16基因甲基化檢測試劑盒20次腫瘤壞死因子配體超家族成員4(TNFSF4)重組蛋白小鼠降鈣素原（PCT）ELISA試劑盒,

人體BRCA－1基因甲基化檢測試劑盒20次腫瘤壞死因子配體超家族成員7(TNFSF7)重組蛋白小鼠蛋白磷酸酶（PP）ELISA試劑盒,

人體BRCA－2基因甲基化檢測試劑盒20次腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體(TRAIL)重組蛋白小鼠抵抗素（Resistin）ELISA試劑盒,

人體E-Cadherin基因甲基化檢測試劑盒20次周期素依賴性激酶4(CDK4)重組蛋白小鼠白三烯B4（LTB4）ELISA試劑盒,
沙門氏菌SPP-sdfi檢測試劑盒(熒光-PCR法)sRANKL(Human soluble receptor activator of nuclear factor-kB ligand) ELISA Kit  人可溶性核因子κB受體活化因子配基鉬酸鈉 ACS

1,25-(OH)2D3/DVD/DHVD 3(Human 1,25-dihydroxyvitamin D3) ELISA Kit  人1,25二羥基維生素D3三氧化鎢 99.8% metals basis

Human histon-H2b ELISA Kit  人組蛋白H2b鎢酸 99%

OPG(Human Osteoprotegerin) ELISA KIT  人骨保護素鎢酸  99.95% metals basis

BMPR- II (Human Bone morphogenetic protein receptor II ) ELISA Kit  人骨成型蛋白受體Ⅱ鎢酸 99.999% metals basis

BMPR-1A(Human Bone morphogenetic protein receptor 1A) ELISA Kit  人骨成型蛋白受體1A二硫化鎢  99.9%

BMP-4(Human Bone morphogenetic protein 4) ELISA Ki  人骨成型蛋白4二硫化鎢  99.99%，6μm

BMP-2(Human Bone morphogenetic protein 2) ELISA Kit  人骨成型蛋白2鉬酸鋅 99.9%

使用方法:

一:培養細胞預處理

1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個培養細胞,離心收集后棄上清。

2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細胞兩次,離心得到的細胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:組織細胞預處理

3. 用剪刀將1g新鮮的動物組織剪碎(芝麻大小*),轉移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動物組織,因為凍凝過程中形成的冰晶會將線粒體刺破,使其DNA釋放出來被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。

三:血液預處理

4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細胞層。

5. 用自備PBS洗滌白細胞兩次,得到的白細胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式動物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級)四:mtDNA提取

5.在細胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續下步操作。

6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復顛倒混勻10次。千萬不要劇烈振蕩。

7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過8分鐘。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見白色沉淀物產生,然后放冰上放置20-25分鐘。

9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉移到離心吸附柱中。由于此時的溶液比重較大,有時候出現沉淀漂浮是正常現象,取上清時避開漂浮的沉淀即可。

10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結合,此步十分重要。

11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會揮發。

13. 重復上步1次。

14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會影響DNA的后續使用(如DNA上樣時不能沉淀到加樣孔中)。

15. 將離心吸附柱置于一個新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產量稍微有所降低。

16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司離心吸附柱結合DNA能力較強,如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來洗脫。

18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。

19. 由于DNA機械斷裂,電泳時DNA可能不呈現專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。

產品留言

標題

聯系人

聯系電話

內容

驗證碼

點擊換一張

注：1.可以使用快捷鍵Alt+S或Ctrl+Enter發送信息!
2.如有必要,請您留下您的詳細聯系方式!