產品特點：

1、公司產品僅用于科研不需要單獨純化線粒體，柱式法純化，操作簡單快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本產品只適合于動物材料，不適合于植物材料，因為植物線粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。

操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

產品組成:

下列是公司正熱銷的產品：

土壤DNA分離試劑盒50次內臟脂肪特異性絲氨酸蛋白酶抑制因子(Vaspin)重組蛋白人基質金屬蛋白酶13（MMP-13）ELISA試劑盒,

土壤DNA分離+高質純化試劑盒20/50次內脂素(VF)重組蛋白人心型脂肪酸結合蛋白（h-FABP）ELISA試劑盒,

冰凍切片DNA分離試劑盒50次鈉/離子轉運ATP酶β3肽(ATP1β3)重組蛋白人血小板反應蛋白/凝血酶敏感蛋白1（TSP-1）ELISA試劑盒,

動物細胞基因組DNA分離試劑盒20/50次腦紅蛋白(NGB)重組蛋白小鼠色素上皮衍生因子（PEDF）ELISA試劑盒,

動物組織基因組DNA分離試劑盒50次腦型脂肪酸結合蛋白(FABP7)重組蛋白大鼠可溶性間粘附分子1（sICAM-1）ELISA試劑盒,

96孔板細胞基因組DNA分離試劑盒10次腦源性神經營養因子(BDNF)重組蛋白大鼠巨噬炎癥蛋白1α（MIP-1α/CCL3）ELISA試劑盒,

48孔板細胞基因組DNA分離試劑盒10次尼克酰腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶1(NOX1)重組蛋白豬D二聚體（D2D）ELISA試劑盒,

赫特法病毒DNA純化試劑盒20次黏病耐藥蛋白1(MX1)重組蛋白菜豆凝集素（PHA）ELISA試劑盒,

乙肝病毒DNA純化試劑盒20次尿激酶型纖溶酶原激活因子(uPA)重組蛋白察氏瓊脂    用于青霉、曲霉鑒定及保存菌種用

EB病毒DNA純化試劑盒20次尿激酶型纖溶酶原激活因子受體(uPAR)重組蛋白假 單胞分離瓊脂用于假單胞菌群的測定

HSV病毒DNA純化試劑盒20次尿皮質素1(UCN1)重組蛋白DL-精氨酸

HHV病毒DNA純化試劑盒20次凝溶膠蛋白(GS)重組蛋白DL-鳥氨酸鹽酸鹽

小量/酵母細胞基因組DNA純化試劑盒20次凝血因子Ⅱ(F2)重組蛋白L-酪氨酸甲酯

革蘭氏陽性基因組DNA純化試劑盒20次凝血因子Ⅴ(F5)重組蛋白L-甘-纈二肽

革蘭氏陰性基因組DNA純化試劑盒20次凝血因子Ⅹ(F10)重組蛋白肌氨酸
鯉浮腫病毒（CEV）檢測試劑盒(熒光-PCR法)INS(Human Insulin) ELISA Kit  人胰島素羅丹明B ≥99.0% (HPLC)

Human C-Peptide ELISA Kit  人C肽羅丹明B 分析標準品，>99.0% (HPLC)

HCG(Human Chorionic Gonadotrophin) ELISA Kit  人絨毛膜促性腺紅熒烯 99%

Beta-CG(Human Chorionic Gonadotrophin Beta) ELISA Kit  人絨毛膜促性腺β海藻酸鈉 AR，90%

LH(Human luteotropic hormone) ELISA Kit  人促黃體乙炔化鈉,二甲苯溶液 18 wt%二甲苯溶液

PS(Human Prednisolone) ELISA Kit  人潑尼松龍琥珀酰氯 96%

LEP(Human Leptin) ELISA kit  人瘦素L-乳酸鈉 98%

LR/Ob-R(Human Leptin receptor) ELISA KIT  人苗條素受體化四苯砷 97%

使用方法:

一:培養細胞預處理

1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個培養細胞,離心收集后棄上清。

2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細胞兩次,離心得到的細胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:組織細胞預處理

3. 用剪刀將1g新鮮的動物組織剪碎(芝麻大小*),轉移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動物組織,因為凍凝過程中形成的冰晶會將線粒體刺破,使其DNA釋放出來被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。

三:血液預處理

4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細胞層。

5. 用自備PBS洗滌白細胞兩次,得到的白細胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式動物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級)四:mtDNA提取

5.在細胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續下步操作。

6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復顛倒混勻10次。千萬不要劇烈振蕩。

7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過8分鐘。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見白色沉淀物產生,然后放冰上放置20-25分鐘。

9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉移到離心吸附柱中。由于此時的溶液比重較大,有時候出現沉淀漂浮是正常現象,取上清時避開漂浮的沉淀即可。

10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結合,此步十分重要。

11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會揮發。

13. 重復上步1次。

14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會影響DNA的后續使用(如DNA上樣時不能沉淀到加樣孔中)。

15. 將離心吸附柱置于一個新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產量稍微有所降低。

16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司離心吸附柱結合DNA能力較強,如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來洗脫。

18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。

19. 由于DNA機械斷裂,電泳時DNA可能不呈現專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。

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