操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

產品特點：

1、公司產品僅用于科研不需要單獨純化線粒體，柱式法純化，操作簡單快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本產品只適合于動物材料，不適合于植物材料，因為植物線粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。

產品組成:

使用方法:

一:培養細胞預處理

1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個培養細胞,離心收集后棄上清。

2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細胞兩次,離心得到的細胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:組織細胞預處理

3. 用剪刀將1g新鮮的動物組織剪碎(芝麻大小*),轉移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動物組織,因為凍凝過程中形成的冰晶會將線粒體刺破,使其DNA釋放出來被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。

三:血液預處理

4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細胞層。

5. 用自備PBS洗滌白細胞兩次,得到的白細胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式動物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級)四:mtDNA提取

5.在細胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續下步操作。

6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復顛倒混勻10次。千萬不要劇烈振蕩。

7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過8分鐘。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見白色沉淀物產生,然后放冰上放置20-25分鐘。

9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉移到離心吸附柱中。由于此時的溶液比重較大,有時候出現沉淀漂浮是正常現象,取上清時避開漂浮的沉淀即可。

10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結合,此步十分重要。

11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會揮發。

13. 重復上步1次。

14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會影響DNA的后續使用(如DNA上樣時不能沉淀到加樣孔中)。

15. 將離心吸附柱置于一個新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產量稍微有所降低。

16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司離心吸附柱結合DNA能力較強,如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來洗脫。

18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。

19. 由于DNA機械斷裂,電泳時DNA可能不呈現專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正熱銷的產品：
脘蛋白基因變異分析試劑盒20次結腸癌轉移關聯基因1(MACC1)重組蛋白人抗Ku抗體（anti-Ku-Ab）ELISA試劑盒, anti-Ku-Ab ELISA kit

活體細胞脘蛋白去糖基化試劑盒20次結蛋白(Des)重組蛋白人抗肌動蛋白抗體（AAA）ELISA試劑盒,AAA ELISA

體外脘蛋白去糖基化試劑盒20次結締組織生長因子(CTGF)重組蛋白人非甲基化寡核苷酸（NON）ELISA試劑盒, 人非甲基化寡核苷酸（NON）ELISA試劑盒,

體外脘蛋白轉化（in vitro conversion）分析試劑盒50次結合珠蛋白(Hpt)重組蛋白人補體片斷4b（C4b）ELISA試劑盒,

脘蛋白糖基化定性分析試劑盒5次睫狀神經營養因子(CNTF)重組蛋白小鼠E選擇素（E-Selectin/CD62E）ELISA試劑盒,

脘蛋白糖基化分型（glycoform）試劑盒5次解整合素金屬蛋白酶10(ADAM10)重組蛋白小鼠CXC趨化因子配體16（CXCL16）ELISA試劑盒,

細胞脘蛋白（PRION）蛋白表達流式細胞儀檢測試劑盒10/20次解整合素金屬蛋白酶8(ADAM8)重組蛋白大鼠窖蛋白Caveolin1（Cav-1）ELISA試劑盒,

載玻片細胞脘蛋白（PRION）蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次金屬硫蛋白1(MT1)重組蛋白魚促卵泡素

冰凍切片組織脘蛋白（PRION）蛋白表達熒光10/20次金屬硫蛋白3(MT3)重組蛋白白色（C.albicans）ELISA試劑盒--動物，人

顯微鏡檢測試劑盒精氨酸加壓素受體1B(AVPR1B)重組蛋白去氧膽酸鹽枸椽酸鹽乳糖蔗糖瓊脂

石蠟切片組織脘蛋白（PRION）蛋白表達熒光10/20次精氨酸酶(ARG)重組蛋白L-天冬酰一水

顯微鏡檢測試劑盒巨噬集落激因子(MCSF)重組蛋白L-纈氨酸甲酯鹽酸鹽

載玻片細胞β脘蛋白（PRION）蛋白表達NBT10/20次巨噬來源趨化因子(MDC)重組蛋白FMOC-L-天冬氨酸

顯色光學顯微鏡檢測試劑盒巨噬炎性蛋白1β(MIP1β)重組蛋白龍膽苦苷 Gentiopicroside

冰凍切片組織脘蛋白（PRION）蛋白表達NBT10/20次巨噬炎性蛋白3α(MIP3α)重組蛋白馬脾鐵蛋白
真鯛虹彩病毒(RSIV)檢測試劑盒(熒光-PCR法)MT(Human Melatonin) ELISA Kit  人褪黑素十六 90%

6-K-PG(Human 6-keto-prostaglandin) ELISA Kit  人6酮前列腺素4-羥基苯甲酰肼 98%

TXB2(Human Thromboxane B2) ELISA Kit  人血栓素B2組 96%

CORT(Human Corticosterone) ELISA Kit  人皮質酮/腎上腺酮雙(基硅烷基)氨基鋰 95%

PGE2(Human Prostaglandin E2) ELISA Kit  人前列腺素E2鄰甲基 99%

DHT(Human Dihydrotestosterone) ELISA Kit  人雙氫睪酮甲酸甲酯 99%,光譜純

GHRH(Human growth hormone releasing hormone) ELISA Kit  人促生長釋放甲酸甲酯 99%

PROG(Human Progesterone) ELISA kit  人孕/孕酮3-巰基酸甲酯  98%

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