產(chǎn)品特點(diǎn)：
1、公司產(chǎn)品僅用于科研不需要單獨(dú)純化線粒體，柱式法純化，操作簡(jiǎn)單快捷。
2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。
3、每107個(gè)動(dòng)物細(xì)胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。
注意：本產(chǎn)品只適合于動(dòng)物材料，不適合于植物材料，因?yàn)橹参锞€粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。
|
產(chǎn)品名稱
|
南非諾卡菌檢測(cè)試劑盒
|
|
規(guī)格
|
50T
|
|
貨號(hào)
|
FS-01P99117
|
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
產(chǎn)品組成:
|
成分
|
規(guī)格
|
|
溶液A
|
13ml
|
|
溶液B
|
13ml
|
|
溶液C
|
18ml
|
|
離心吸附柱
|
50套
|
|
通用洗柱液
|
50ml
|
|
DNA洗脫液
|
10ml
|
|
說(shuō)明書(shū)
|
1份
|
下列是公司正熱銷的產(chǎn)品：
3' 端DNA地高辛轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記試劑盒10次小鼠前列腺酸性磷酸酶elisa檢測(cè)試劑盒品牌
RNA探針地高辛聚合酶標(biāo)記試劑盒10次小鼠脂蛋白αelisa檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
生物素標(biāo)記試劑專題小鼠α1酸性糖蛋白elisa檢測(cè)試劑盒品牌
名稱規(guī)格小鼠戊糖素elisa檢測(cè)試劑盒多少錢
3' 端DNA生物素轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記試劑盒10次小鼠雙氫睪酮elisa檢測(cè)試劑盒品牌
3' 端DNA生物素轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記鑒定試劑盒10次小鼠水通道蛋白3elisa檢測(cè)試劑盒多少錢
生物素標(biāo)記封閉溶液100毫升小鼠血紅素氧合酶1elisa檢測(cè)試劑盒多少錢
去垢劑試劑專題小鼠周期素D3elisa檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
名稱規(guī)格小鼠吡啶交聯(lián)物elisa檢測(cè)試劑盒品牌
10% TWEEN 20溶液100毫升小鼠環(huán)孢素Aelisa檢測(cè)試劑盒品牌
95% TWEEN 20溶液100毫升小鼠皮質(zhì)醇elisa檢測(cè)試劑盒多少錢
10%TWEEN 80溶液100毫升小鼠內(nèi)皮素1elisa檢測(cè)試劑盒多少錢
10%Triton X-100溶液100毫升小鼠維生素Eelisa檢測(cè)試劑盒哪里有買
10%Triton X-114溶液100毫升小鼠神經(jīng)肽Yelisa檢測(cè)試劑盒多少錢
10%NP-40溶液100毫升小鼠肌球蛋白elisa檢測(cè)試劑盒哪里有買
南非諾卡菌檢測(cè)試劑盒IL-22R/IL22RA1/FITC 熒光素標(biāo)記白介素-22受體抗體IgG聚己內(nèi)酰粉 60-90目
IL-22BP/IL22RA2/FITC 熒光素標(biāo)記白介素22受體結(jié)合蛋白抗體IgG聚己內(nèi)酰粉 90-180目
IL-23/FITC 熒光素標(biāo)記白介素-23抗體IgG橙黃G AR，≥80.0% (HPLC)
IL-23R/FITC 熒光素標(biāo)記抗白介素-23受體抗體IgG十八烷 AR，98%
IL-26/AK155/FITC 熒光素標(biāo)記白介素26抗體IgG十八烷 99%
IL-28A/IFNL2/FITC 熒光素標(biāo)記白介素28A抗體IgG十八烷 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥99.5% (GC)
IL-28B/IL-28C/FITC 熒光素標(biāo)記白介素28B抗體IgG十八烷 Standard for GC, ≥99.5% (GC)
IL-29/IFNL1/FITC 熒光素標(biāo)記白介素29抗體IgG二十八烷 AR,≥97.0% (GC)
使用方法:
一:培養(yǎng)細(xì)胞預(yù)處理
1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個(gè)培養(yǎng)細(xì)胞,離心收集后棄上清。
2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細(xì)胞兩次,離心得到的細(xì)胞沉淀直接用于mtDNA提取。
二:組織細(xì)胞預(yù)處理
3. 用剪刀將1g新鮮的動(dòng)物組織剪碎(芝麻大小*),轉(zhuǎn)移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動(dòng)物組織,因?yàn)閮瞿^(guò)程中形成的冰晶會(huì)將線粒體刺破,使其DNA釋放出來(lái)被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。
三:血液預(yù)處理
4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細(xì)胞層。
5. 用自備PBS洗滌白細(xì)胞兩次,得到的白細(xì)胞沉淀用于mtDNA提取。
柱式動(dòng)物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級(jí))四:mtDNA提取
5.在細(xì)胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續(xù)下步操作。
6. 加入250μL常溫的溶??B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復(fù)顛倒混勻10次。千萬(wàn)不要?jiǎng)×艺袷帯?/span>
7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過(guò)8分鐘。
8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見(jiàn)白色沉淀物產(chǎn)生,然后放冰上放置20-25分鐘。
9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。由于此時(shí)的溶液比重較大,有時(shí)候出現(xiàn)沉淀漂浮是正常現(xiàn)象,取上清時(shí)避開(kāi)漂浮的沉淀即可。
10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結(jié)合,此步十分重要。
11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。
12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。
注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會(huì)揮發(fā)。
13. 重復(fù)上步1次。
14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會(huì)影響DNA的后續(xù)使用(如DNA上樣時(shí)不能沉淀到加樣孔中)。
15. 將離心吸附柱置于一個(gè)新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預(yù)熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產(chǎn)量稍微有所降低。
16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。
17. 由于本公司離心吸附柱結(jié)合DNA能力較強(qiáng),如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當(dāng)于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來(lái)洗脫。
18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個(gè)動(dòng)物細(xì)胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。
19. 由于DNA機(jī)械斷裂,電泳時(shí)DNA可能不呈現(xiàn)專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。
- 溫馨提示：為規(guī)避購(gòu)買風(fēng)險(xiǎn)，建議您在購(gòu)買前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)與產(chǎn)品質(zhì)量。
- 免責(zé)申明：以上內(nèi)容為注冊(cè)會(huì)員自行發(fā)布，若信息的真實(shí)性、合法性存在爭(zhēng)議，平臺(tái)將會(huì)監(jiān)督協(xié)助處理，歡迎舉報(bào)