操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。
產品特點：
1、公司產品僅用于科研不需要單獨純化線粒體，柱式法純化，操作簡單快捷。
2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。
3、每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。
注意：本產品只適合于動物材料，不適合于植物材料，因為植物線粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。
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產品名稱
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莢膜組織胞漿菌檢測試劑盒
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規格
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50T
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貨號
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FS-01P99113
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產品組成:
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成分
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規格
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溶液A
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13ml
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溶液B
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13ml
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溶液C
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18ml
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離心吸附柱
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50套
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通用洗柱液
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50ml
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DNA洗脫液
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10ml
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說明書
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1份
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使用方法:
一:培養細胞預處理
1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個培養細胞,離心收集后棄上清。
2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細胞兩次,離心得到的細胞沉淀直接用于mtDNA提取。
二:組織細胞預處理
3. 用剪刀將1g新鮮的動物組織剪碎(芝麻大小*),轉移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動物組織,因為凍凝過程中形成的冰晶會將線粒體刺破,使其DNA釋放出來被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。
三:血液預處理
4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細胞層。
5. 用自備PBS洗滌白細胞兩次,得到的白細胞沉淀用于mtDNA提取。
柱式動物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級)四:mtDNA提取
5.在細胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續下步操作。
6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復顛倒混勻10次。千萬不要劇烈振蕩。
7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過8分鐘。
8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見白色沉淀物產生,然后放冰上放置20-25分鐘。
9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉移到離心吸附柱中。由于此時的溶液比重較大,有時候出現沉淀漂浮是正常現象,取上清時避開漂浮的沉淀即可。
10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結合,此步十分重要。
11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。
12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。
注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會揮發。
13. 重復上步1次。
14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會影響DNA的后續使用(如DNA上樣時不能沉淀到加樣孔中)。
15. 將離心吸附柱置于一個新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產量稍微有所降低。
16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。
17. 由于本公司離心吸附柱結合DNA能力較強,如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來洗脫。
18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。
19. 由于DNA機械斷裂,電泳時DNA可能不呈現專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正熱銷的產品：
裂解液Ⅳ不確保細胞內活性的成分制備小鼠胰島素受體βelisa檢測試劑盒說明書
裂解液Ⅴ紅細胞裂解液/白細胞分離小鼠抗心肌抗體elisa檢測試劑盒哪里有買
裂解液Ⅵ線粒體裂解液小鼠蛋白激酶Belisa檢測試劑盒多少錢
裂解液Ⅶ-1裂解液小鼠白三烯C4elisa檢測試劑盒品牌
裂解液VII-2葡萄球菌裂解液小鼠15脂加氧酶elisa檢測試劑盒說明書
裂解液Ⅷ活性化蛋白制備小鼠脫氫表雄酮硫酸酯elisa檢測試劑盒品牌
裂解液Ⅸ/酵母細胞裂解液小鼠周期素D1elisa檢測試劑盒哪里有買
裂解液Ⅸ/酵母細胞超強裂解液小鼠胃蛋白酶elisa檢測試劑盒多少錢
裂解液Ⅹ/酵母細胞活性化蛋白制備小鼠信號轉導分子elisa檢測試劑盒品牌
裂解液ⅩI非變性細胞蛋白制備小鼠抵抗素elisa檢測試劑盒哪里有買
10％AEBSF溶液完全保留細胞內成分活性小鼠維生素K1elisa檢測試劑盒哪里有買
RIPA基礎裂解液不含有蛋白酶和磷酸酶抑制劑小鼠血管活性腸肽elisa檢測試劑盒說明書
RIPA完全裂解液含有蛋白酶和磷酸酶抑制劑小鼠乙酰膽堿受體抗體elisa檢測試劑盒
通用型非變性裂解液適合各種細胞native蛋白小鼠血紅素氧合酶2elisa檢測試劑盒品牌
10X通用型非變性裂解液適合各種細胞native蛋白小鼠血管緊張素原elisa檢測試劑盒說明書
莢膜組織胞漿菌檢測試劑盒IL-12R Beta1/CD212/FITC 熒光素標記白介素-12受體β1抗體IgG基藍 Indicator
IL-12R Beta2/FITC 熒光素標記白介素-12受體β2抗體IgG紫脲酸銨 IND
IL-13/FITC 熒光素標記白介素13抗體IgG乙酸甲酯 分析標準品，99.9%（GC)
IL-13Ra1/FITC 熒光素標記白介素-13受體a1抗體IgG2-甲基戊烷 Standard for GC, ≥99% (GC)
IL-13Ra2/FITC 熒光素標記白介素-13受體a2抗體IgG13X分子篩 60-80目，氣相、液相色譜柱
IL-14/Taxilin alpha/FITC 熒光素標記抗白介素14抗體IgG甲基百里香酚藍 AR
IL-15/FITC 熒光素標記白介素15抗體IgG甲基百里香酚藍 Dye content 80 %
IL-15R Alpha/FITC 熒光素標記白介素15受體α抗體IgG酚試劑 AR,98.0%
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