操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

產品特點：

1、公司產品僅用于科研不需要單獨純化線粒體，柱式法純化，操作簡單快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本產品只適合于動物材料，不適合于植物材料，因為植物線粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。

產品組成:

使用方法:

一:培養細胞預處理

1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個培養細胞,離心收集后棄上清。

2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細胞兩次,離心得到的細胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:組織細胞預處理

3. 用剪刀將1g新鮮的動物組織剪碎(芝麻大小*),轉移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動物組織,因為凍凝過程中形成的冰晶會將線粒體刺破,使其DNA釋放出來被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。

三:血液預處理

4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細胞層。

5. 用自備PBS洗滌白細胞兩次,得到的白細胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式動物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級)四:mtDNA提取

5.在細胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續下步操作。

6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復顛倒混勻10次。千萬不要劇烈振蕩。

7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過8分鐘。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見白色沉淀物產生,然后放冰上放置20-25分鐘。

9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉移到離心吸附柱中。由于此時的溶液比重較大,有時候出現沉淀漂浮是正常現象,取上清時避開漂浮的沉淀即可。

10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結合,此步十分重要。

11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會揮發。

13. 重復上步1次。

14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會影響DNA的后續使用(如DNA上樣時不能沉淀到加樣孔中)。

15. 將離心吸附柱置于一個新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產量稍微有所降低。

16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司離心吸附柱結合DNA能力較強,如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來洗脫。

18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。

19. 由于DNA機械斷裂,電泳時DNA可能不呈現專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正熱銷的產品：
通用型豬丹毒（SeMr）基因檢測試劑盒20次副百日咳波氏桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒

通用型豬支原體肺炎（Mycoplasma hyopneumoniae；MH）20次牛仰口線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒

基因檢測試劑盒犬布魯氏桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒

通用型豬流感（SI）基因檢測試劑盒20次光滑探針法熒光定量PCR試劑盒

通用型豬胸膜肺炎感染（Actinobacillus pleuropneumoniae；App）20次空腸彎曲桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒

基因檢測試劑盒桿狀巴爾通體探針法熒光定量PCR試劑盒

通用型豬偽??犬病（Pseudorabies Virus-Aujeszky’s disease；PRV/ADV）基因檢測試劑盒20次包納米蟲屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒

通用型豬瘟（Classical swine fever；CSFV）基因檢測試劑盒20次殺蠣包拉米蟲探針法熒光定量PCR試劑盒

通用型非洲豬瘟（African swine fever virus；ACSF）20次芽囊原蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒

基因檢測試劑盒水牛正痘病探針法熒光定量PCR試劑盒

通用型豬口蹄疫（foot and mouth disease；FMD）20次牛巨病探針法熒光定量PCR試劑盒

基因檢測試劑盒禽波氏桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒

通用型豬水皰病（SVDV）基因檢測試劑盒20次雙歧桿菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒

通用型豬細小病毒（PPV）基因檢測試劑盒20次巴氏阿米巴原蟲探針法熒光定量PCR試劑盒

通用型豬沙門氏菌（Swine Salmonella）基因檢測試劑盒20次羊仰口線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒
禽流感病毒H7N2亞型檢測試劑盒Endo G /FITC  熒光素標記核酸內切酶G抗體IgG草達津 分析標準品

Phospho-ELk1 (Ser383) /FITC  熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化轉錄因子ELK1抗體IgG四苯基錫 分析標準品

Emp1/FITC  熒光素標記表皮膜蛋白1抗體IgG苯磺隆 分析標準品，95%

Endostatin/FITC  熒光素標記內皮抑素/內皮他丁抗體IgG吡螨 分析標準品

envelope glycoprotein Yellow fever virus/FITC  熒光素標記抗黃熱病包膜糖蛋白抗體IgG唑 分析標準品，99.2%

 Beta-endorphin/FITC  熒光素標記人、大、小鼠、羊、牛beta內啡肽抗體IgG噻蟲啉  分析標準品

ENPP1/PC-1/FITC  熒光素標記抗核苷酸內焦磷酸酶/磷酸二酯酶1抗體IgG唑蟲酰 分析標準品，99%

EGFL7/FITC  熒光素標記抗脈管發育(組裝)蛋白抗體IgG氯乙烯標準溶液1000ng/ul,溶劑:甲

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