實驗常用的細胞染色操作：

1、消化收集細胞，以2-10×103 cell/coverslip 接種細胞于24孔板中，滴加細胞懸液50-100μl，2小時后補加10%FBS+DMEM500μl

2、37℃細胞培養箱中培養48小時后，顯微鏡下觀察，取細胞狀態和細胞數量適應的玻片做染色。

3、去掉舊培養液，用冰冷的PBS洗兩次，加3.7-4%甲醛0.5ml(in PBS)室溫固定10min

4、PBS洗兩次，加穿膜液0.5ml(0.1%triton X-100+0.1M Gycine)冰上30min

5、PBS洗兩次，加5mg/ml BSA 0.3ml室溫封閉1小時。

6、PBS洗兩次，取一張封口膜，做好標記，加一抗(用5mg/ml BSA稀釋1：50-100)25μl于封口膜上，將蓋玻片細胞面朝下反扣在一抗液滴上，放在濕盒中室溫孵育1-3小時，將蓋玻片從封口膜上小心夾起，細胞面朝上放入原來的24孔板中，PBS洗兩次，取另外一張封口膜，做好標記，加二抗(羊抗兔羅丹明，用5mg/ml BSA稀釋1：50-100）25μl于封口膜上，將蓋玻片細胞面朝下反扣在一{二}抗液滴上，放在濕盒中室溫黑暗中孵育1-3小時

7、同上PBS洗兩次，同上操作，將玻片與10μl DAPI （1μg/ml in PBS，貯存液：1mg/ml in dd H2O）室溫孵育1-5min.

8、PBS 洗三次，將玻片背面的水分擦干，封片于載玻片上，做好標記（時間，細胞名稱，實驗內容，號碼）

9、待封片膠干后可在熒光顯微鏡下觀察，觀察時注意記錄每張玻片的內容以免混淆，觀察完后將玻片放-20℃保存。

10、若只觀察轉染了EYFP的熒光蛋白，不需要給內源蛋白染色，可直接用DAPI染核后封片。11、以BSA (5mg/ml)代替一抗，二抗照加為染色的對照組，做法同上。為了保證實驗有重復性，每次做平行2組以上。