原代細胞培養(yǎng)就像是從種子開始種一棵樹,要把動物組織從機體里取出來,經(jīng)過各種處理,讓細胞在培養(yǎng)基里生存、生長和繁殖。
準備材料和儀器:
儀器:培養(yǎng)箱(37℃)、培養(yǎng)瓶、吸管、離心機……
材料:動物組織塊
試劑:1640培養(yǎng)基(含20%小牛血清)、0.25%胰酶、Hank's液等。
處理組織:
把組織塊放在燒杯里,用Hank's液洗2-3次,去掉血污。如果懷疑污染,就用青鏈霉素泡30-60分鐘。
剪切和消化:
用眼科剪把組織切成2-3毫米的小塊,然后加入胰蛋白酶液,放到37℃的溫箱里消化。每隔20分鐘搖一搖,直到細胞分散成團或單個細胞。??
分離和計數(shù):
用篩子過濾掉沒消化開的組織塊,離心后吸出上清,加入培養(yǎng)液。用計數(shù)板數(shù)一數(shù)細胞密度,調(diào)整好后分裝到培養(yǎng)瓶里。
培養(yǎng):
把培養(yǎng)瓶放到36.5℃的溫箱里,靜待細胞生長。如果用CO?溫箱,記得用紗布或螺旋帽堵住瓶口。