犬血支原體PCR檢測試劑盒反應(yīng)的特異性決定因素為:

1.引物與模板DNA特異正確的結(jié)合。

2.堿基配對(duì)原則。

3. Tag DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性。

4.靶基因的特異性與保守性。

其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及 Tag DNA聚合醇耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大増加加,被擴(kuò)増的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。

靈敏度高

PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式増加的,能將皮克(pg=10-129)量級(jí)的起始待測模板擴(kuò)増到微克(ug=10-69)水平。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在xi 菌學(xué)中zu小檢出率為3個(gè)xi菌。

(3)簡便、快速

PCR反應(yīng)用耐高溫的 Tag DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)増液和水浴鍋上進(jìn)行變性退火-延伸反應(yīng),一般在2-4小時(shí)完成擴(kuò)増反應(yīng)。擴(kuò)増產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。

(4)對(duì)標(biāo)本的純度要求低

不需要分離病毒或xi菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)増模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

注意事項(xiàng)：    

1、使用本試劑前請(qǐng)仔細(xì)閱讀本說明書全文。

2 、操作時(shí)應(yīng)盡量少說話，因口腔中也含有支原體，可能引起樣品污染，而造成假陽性；整個(gè)檢測過程中，反應(yīng)體系的配制、樣本處理及加樣、PCR擴(kuò)增應(yīng)分區(qū)域進(jìn)行，以避免交叉污染。

3 、實(shí)驗(yàn)時(shí)，試劑盒組分中的試劑使用前應(yīng)充分融化并混勻（混勻時(shí)禁止激烈振蕩，只需要進(jìn)行上下倒置多次進(jìn)行混勻）。

4、 反應(yīng)管中加好所有的試劑后，應(yīng)盡快上PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增，以免形成過多的二聚體。 

5、細(xì)胞培養(yǎng)物中含有青霉素和鏈霉素等抗生物素不會(huì)影響本品的檢測結(jié)果。如果用戶需要進(jìn)一步提高檢測。