在無菌潔凈室內進行生產制造時，必須確保在潔凈室內使用的各種消耗品的潔凈度，因為它們潔凈程度對環境或產品造成危害是十分嚴重的，例如手帕、手套、拖把、管道等。要保證*終產品的無菌狀態，在無菌狀態進行加工生產，其效果遠遠好于生產完成后再進行**處理。在無菌環境內，若使用已經被污染的消耗品，很可能會導致整個生產加工過程的失敗。
       在生產中可以采用多種方法對產品進行**，如高壓蒸汽**、電子束**和伽馬輻射**。每一種**方法都有它自身的優點和缺點，對于某些方面是適用，但對另一些方面就不適用。
      高壓蒸汽**器使用蒸汽和高壓對產品進行**。這種**方法的缺點是許多產品在進行高壓蒸汽**前需要二次包裝，并且這些包裝袋必須具有滲透性。顯然，在加工過程中增加了作業的時間和產品的成本。然而，對于那些擁有自己設備的廠家，使用高壓蒸汽**方法成本比較合理，特別是當對小批量產品進行**時會采用該方法。
      電子束**方法的穿透能力相對較低，因而只能用于低密度產品**。
      伽馬輻射**方法的穿透能力較高，因而成為高密度產品和大批量產品優選的**方法。這種方法能夠有效地消滅遍布產品及其包裝上的微生物，而溫度只有少許變化。由于伽馬射線的穿透特性，產品可以使用非穿透性包裝。這種**方法廣泛應用在各種各樣的行業，例如食品、化妝品、醫療器械和藥品。
      伽馬射線由鈷60放射源產生并且容易電離。輻射電離的過程可產生足夠的能量來改變原子或分子結構中電子的運動軌跡，但是又不會在產品內產生放射能。電離輻射對于微生物具有致命的殺傷效果。因批次與批次之間的產品**效果變化*小，所以伽馬輻射**方法是可靠的**方法（見圖1）。

圖1 伽馬射線由鈷60放射源產生。
照片由STERIS Isomedix Services
公司提供。

僅用輻射還不夠
       “輻射”和“**”這兩個詞是不能相互代替的。單獨進行輻射這種方法，并沒有得到美國食品和藥品監督管理局及大多數藥品生產廠家的認可，將它作為**的證明。輻射僅僅表明產品被暴露在伽馬射線下，它不能提供任何證據，表明一個產品接受了有效的照射劑量，達到了無菌狀態，并且不能計算出無菌保證等級（SterilityAssurance Level，SAL）。
         ANSI/AAMI/ISO都不推薦使用生物指示劑進行無菌確認和加工過程控制。由于需要太多數量的檢測樣本，導致不可能進行SAL低于10-2（例如10-3、10-4等等）的無菌狀態測試，10-6的SAL要求一百萬個檢測樣本中允許有一個帶菌樣本。為了證明達到10-6的無菌置信水平，需要將一百萬個樣本先進行無菌處理然后再進行無菌檢測。很顯然，這是不切實際的。
       ANSI/AAMI/ISO已經制定了國際標準用來確認**過程，即提供必要的文件來證明所采用的**方法和過程。各種各樣的**方法，適用于不同的產品及它們的特性。廣泛使用的標準是11137-1994。歐盟（EU）也制定了標準：EN552:1994，當產品在全球范圍內銷售時，也應該考慮這個標準。幸運地是，在ANSI/AAMI/ISO標準和EU標準之間有一致的約定。確認過程必須包含產品未加工的原材料和組件、包裝物的微生物**特性和進行生產、組裝及包裝產品的環境控制。
       開始無菌確認過程之前，必須確定產品和包裝能夠經受得住輻射**方法，這一點十分必要。因為一些原材料暴露在放射源下會變的脆弱或退色，已經證明某些材料在這種情況下會影響它們的預期使用?？梢詫a品和包裝暴露在不同的輻射水平下，然后在依據規范對產品進行檢測來*終確定它所能承受的*大劑量。如果從外面購買包裝物，可從供應商處得到有關密封完整性和包裝物兼容性的數據資料。多數的包裝產品供應商能夠提供相關的合格證明或分解報告。

標準和指導方針
現有幾個ANSI/AAMI/ISO的指導方針可以指導進行**過程的驗證。應選擇*適合你的產品和生產加工過程的標準來滿足預期的SAL要求。ANSI/AAMI/ISO標準11137-1994中的方法1是被大家普遍采用的常規生產程序，包括利用抗生物負載原理建立的**劑量。AAMI/ISO13409標準一般適用于罕見的生產和證實25kGy的*小輻射劑量值。SAL水平不但應該進行選擇，而且通常以產品的預期用途作為指導。對于入侵性醫療器械，一般公認的SAL水平是10-6，這是所應用的SAL水平中的***別。多數歐洲國家對于無菌產品的要求只認可10-6的SAL，因此*小劑量應依據產品購買國的標準。

執行*初的確認
本文中我們將集中探討ANSI/AAMI/ISO11137中的方法1。從每三批即將進行**處理的產品中隨機抽取10個樣本進行生物負載研究。如果檢測的項目非常大或者非常昂貴，那么將對部分項目樣本（SIP）進行生物負載性
測試，然后對檢測結果進行修正，作為全部產品的檢測結果。生物負載性測試包括對活的生物體進行**、**培養和數目統計。對100個產品樣本按照確認的劑量進行輻射**，以達到10-2級別的SAL。然后對100個樣本進行無菌檢測，如果有少于2個樣本呈現陽性（非無菌），那么這個結果是可以接受的。SAL常規**劑量可以在原始的生物負載性檢測結果的基礎上計算得出。國際標準ANSI/AAMI/ISO11137 中提供了一個基于產品生物負載性的數據表格，其中列明了為達到選定的SAL水平而必需的劑量。

季度性核查
ANSI/AAMI/ISO 11137-1994標準中建議每間隔三個月對**劑量進行一次重新確認。規定的程序是從即將進行**的一批產品中抽取110個樣品單元。10個樣品單元進行生物負載檢測，100個樣品采用已確定的原始劑量設置中的確認劑量（10-2）。由于季節性波動、原材料和組件的變化、****或環境變化均可能引起生物負載性變化，通過檢測這一變化確認校準過程。生物體對于輻射抵抗力的變化也會影響認證結果。季度性再確認*好應該包括某些類型包裝的完整性檢測（例如，爆裂檢測，亞甲藍染料檢測或微生物**性試驗等）。

生物負載恢復和**抑制/抑**測試
在*初確認中要求進行其他的幾種檢測。生物負載過程必須對生物體恢復的能力進行評估。一種確定生物負載取樣方式有效的方法是將已知數量的生物負載接種到無菌單元上。按照取樣方法進行就可得到確定的恢復率?；謴拖禂涤脕碚{整生物負載計數。例如，如果生物負載的恢復系數是80%，*初的生物負載計算結果是150，那么現在的計數結果應調整為188（150/0.8）。另外一種方法是進行重復性恢復過程，進行多次抽取樣本的方法直到微生物的恢復率沒有顯著的增加為止。
美國藥典(USP)中關于**抑制/抑制**（B/F）測試證明產品不能抑制微生物的生長，因此要去除無菌檢測中的假陰性的可能性。在標準的無菌檢測中，在產品上填加經過挑選的低水平的微生物，七天之內，檢測結果顯示陽性。檢測樣本中的生長情況表明在檢測產品內或檢測產品上不存在抑制物質。

照射工具
選擇一種放射設備來對產品進行**處理時，應該考慮很多問題。所生產產品的類型、輻射成本和采用與已有設備相似的輻照器等，都是選擇時應考慮的因素。你應該選擇一種符合cGMP和ISO9000認證的放射產品。推薦大家對供應商進行審查，以便確保他們能夠滿足你的要求。應針對你的產品繪制放射設備的劑量圖表，以便確定制動器或容器的位置、吸收*少數量射線的位置和吸收*大數量射線的位置。在一些特定區域放置放射量測定器，代表每一個包裝結構的軸線?；趧┝繄D表的信息，可以確定產品的裝載方式（見圖2）。

圖2 按照預先設定的裝載方式
手提插入一個放射小室。照片由
STERIS Isomedix Services 公
司提供。
在使用說明書中詳述了裝載的結構并且每次裝載都采用同樣的方式。對于每次裝載，在預先確定*小劑量和*大劑量的位置放置兩個放射量測定器。另外還有放射指示劑限??。
注意觀察放射指示劑十分重要。指示劑通常應用于總量控制，可以發現某些產品不能提供有效的**指示，它的確能迅速指示產品是否已經完成了放射循環。通常顏色指示劑的變化是放射后由黃色變為紅色，然而應注意到pH的改變可能引起指示劑顏色的變化，這也十分重要。例如，在堿性環境中，包裝指示劑的顏色可能在放射后變回黃色。
假如消耗品供應商提供了無菌證明（CoS），那么它應該包括必需的信息來證明產品已經按照經過確認的**過程進行**處理。CoS應該說明產品的數量、批量、放射運轉數量、放射日期、陳述產品**的程度和**過程確認的方式、*大和*小劑量、批準者的簽名和頭銜，批準者應是質量檢驗機構代表。CoS將作為產品的無菌記錄保存。

環境監控
環境和加工過程中的因素可能影響生物負載水平。因為這個原因，建議無菌潔凈室消耗品的供應商應進行生產環境的檢測，以便追蹤潛在的污染物，例如人員、空氣、表面、去離子水、設備表面、化學藥品、零件、組件和原材料。例如，可以使用一個RCS空氣取樣器對空氣的生物負載進行取樣，空氣中存在的任何微生物都有可能被吸取到取樣器內部的培養基帶上，然后對培養基進行**培養，以便計算生物負載性水平。
如果在無菌環境中進行生產制造，確定潔凈室消耗品已進行有效的**處理是十分重要的。單純對消耗品進行照射不能保證它們無菌。應對供應商索要每一批**產品的無菌證明，來保證消耗產品不但進行了輻射**，并且這個**過程已被確認符合ANSI/AAMI/ISO標準中的要求。