目前，2014采購計(jì)劃申報(bào)工作已經(jīng)結(jié)束，今年有不少用戶對**的Western Blot分析儀器非常感興趣。但在于用戶溝通過程中，我們發(fā)現(xiàn)大家對怎樣選擇多色熒光凝膠成像系統(tǒng)，多不甚清楚，在是選擇多色熒光凝膠成像還是化學(xué)發(fā)光凝膠成像這個(gè)問題上，有些糾結(jié)。我想主要是因?yàn)榻榻B這兩種技術(shù)和設(shè)備的文章較少有關(guān)，為此，我們僅以有限的知識在此為大家拋磚引玉，希望能對今后的選擇提供些建議。
首先，我們先分別對化學(xué)發(fā)光成像和多色熒光凝膠成像的特點(diǎn)和應(yīng)用做簡要介紹。
一、化學(xué)發(fā)光凝膠成像的特點(diǎn)：
化學(xué)發(fā)光是在一些特殊的化學(xué)反應(yīng)中吸收了反應(yīng)釋放的化學(xué)能,而處于電子激發(fā)態(tài)的反應(yīng)中間體或反應(yīng)產(chǎn)物由激發(fā)態(tài)回到基態(tài)時(shí)所產(chǎn)生的一種光輻射,化學(xué)發(fā)光分析是根據(jù)化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)物的光輻射(化學(xué)發(fā)光)確定物質(zhì)含量的一種痕量分析方法。它的特點(diǎn)是靈敏度高和線性范圍寬, 不需要任何光源,只需要高靈敏度的光電轉(zhuǎn)換元件和電子放大裝置,因而儀器設(shè)備簡單,操作簡便,分析快速,易于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化和連續(xù)分析,而且可與其它分析方法聯(lián)合使用,進(jìn)一步拓寬其應(yīng)用范圍。
在Western雜交檢測中，目前*主要的檢測方法有化學(xué)發(fā)光Chemilumin escent和底物顯色Colormetirc/Chromogen，其中前者靈敏度很高——隨著各大廠家努力開發(fā)研制靈敏度更高的發(fā)光底物，化學(xué)發(fā)光法的靈敏度已經(jīng)達(dá)到pg級別，甚至還有 Femto級別的，靈敏度超過了同位素，已經(jīng)成為了Western雜交*常規(guī)的檢測方法。*常用的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記酶是辣根過氧化物酶HRP（Horseradish Peroxidase，屬于過氧化物酶POD類）和堿性磷酸酶AP（Alkaline Phosphatase）。
傳統(tǒng)的化學(xué)發(fā)光檢測方法通常需要膠片成像，膠片成像可以保證較高的靈敏度，但也有很多缺點(diǎn)：耗時(shí)，需要暗房和顯影劑，膠片很貴，而且需要很多消耗品，需要持續(xù)購買。另外，用膠片上的蛋白條帶進(jìn)行定量也是幾乎不可能，和目測一塊考馬斯藍(lán)染的膠沒什么區(qū)別，而且膠片成像時(shí)間只能預(yù)先設(shè)定，如果曝光過度或者不足則需要再次進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，非常麻煩。
數(shù)字成像系統(tǒng)的出現(xiàn)極大克服了傳統(tǒng)膠片法的一些弊端，近年來隨著冷卻CCD技術(shù)的發(fā)展，數(shù)字成像系統(tǒng)成本越來越低，成像效果同時(shí)獲得大大提升，因而CCD成像系統(tǒng)逐漸成為了實(shí)驗(yàn)室Western Blot的主要設(shè)備。同時(shí)目前很多Western blot的新技術(shù)也都是針對CCD成像系統(tǒng)的，目前CCD成像系統(tǒng)的靈敏度已經(jīng)可以達(dá)到甚至超過傳統(tǒng)的膠片成像。冷卻型CCD照相機(jī)與X膠片相比具有瞬時(shí)影像處理、高靈敏度、高分辨率、動(dòng)力學(xué)范圍廣等優(yōu)點(diǎn)，而且還不需要膠片處理裝置、后續(xù)耗材投入及暗室。
二、多色熒光凝膠成像
在做western blot的檢測時(shí)，有時(shí)會(huì)碰到電泳后兩個(gè)分子量相近的蛋白分離不開，距離相近或者重疊，例如磷酸化和非磷酸化的蛋白；或者是同一次實(shí)驗(yàn)中，檢測一種以上的蛋白抑或是利用內(nèi)參蛋白對目的蛋白的定量分析進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。遇到以上這樣的實(shí)驗(yàn)需求，化學(xué)發(fā)光的檢測方**顯得繁瑣復(fù)雜，其必須經(jīng)過剝脫抗體和重行孵育新抗體的過程，不僅耗時(shí)費(fèi)力，而且不能進(jìn)行**的定量分析，由此多色熒光成像的技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生。多色熒光凝膠成像，是利用不同的熒光染料（如Cy2 ,Cy3, Cy5）標(biāo)記二抗，標(biāo)記不同熒光染料的二抗分別對應(yīng)不同的目的蛋白，以此實(shí)現(xiàn)通過檢測不同熒光染料的信號強(qiáng)度，間接實(shí)現(xiàn)一次實(shí)驗(yàn)可檢測多種蛋白，同時(shí)也可以進(jìn)行**的定量分析。
通過上面的介紹，我們知道多色熒光凝膠成像系統(tǒng)，同化學(xué)發(fā)光凝膠成像系統(tǒng)一樣，也是Western Blot檢測分析儀器的一種，它很好的解決了化學(xué)發(fā)光凝膠成像系統(tǒng)不易解決的問題，某種程度上，我們可以認(rèn)為它是化學(xué)發(fā)光凝膠成像的一個(gè)很好的補(bǔ)充，畢竟，化學(xué)發(fā)光是Western Blot應(yīng)用*廣的的主要儀器。所以，一款**的多色凝膠成像系統(tǒng)，不僅僅是有著**的多色熒光凝膠成像所必須的光源、CCD、鏡頭和分析軟件，也要考慮到對化學(xué)發(fā)光凝膠成像高靈敏度的需求。如此，怎樣選擇多色熒光凝膠成像系統(tǒng)的問題，就不再糾結(jié)了。
下面以*早推出多色熒光凝膠成像系統(tǒng)的ALPHA公司的FluorChem Q為例，簡要介紹系統(tǒng)的設(shè)計(jì)特點(diǎn)。
FluorChem Q是ALPHA公司2008年新推出的一款集多色熒光、化學(xué)發(fā)光以及可見光檢測于一體的成像系統(tǒng)，是在其**化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)HD2基礎(chǔ)上增加了用于多通道熒光檢測三色LED光源，并將濾光片位置從5個(gè)增加至6個(gè)，同時(shí)，Alphaview Q軟件具有多通道熒光成像捕獲和分析功能。這些改進(jìn)和設(shè)計(jì)體現(xiàn)了其強(qiáng)大的多色熒光成像和分析功能。
1、 雙反射高強(qiáng)度三色LED燈：3個(gè)波長(475nm, 534nm, 632nm)的激發(fā)熒光 (Cy3, Cy5, Cy2)光源加上FluorChem HD2本身具有的雙波長（302nm和365nm）紫外透射燈，可實(shí)現(xiàn)*多5種熒光染料的檢測。
2、 濾光片位置從FluorChem HD2的5個(gè)增加至6個(gè)，為多色熒光成像系統(tǒng)提供更多種類光通道的需求。
3、 Alphaview Q軟件具有多通道熒光成像捕獲和分析功能，可自動(dòng)切換激發(fā)光源和濾光片，完成多通道熒光圖像的的拍攝。獨(dú)特的channel view功能，可以單獨(dú)觀察每個(gè)熒光通道的圖像；流水線式的定量分析多色熒光條帶或斑點(diǎn)。
保證了FluorChem Q能夠進(jìn)行多色熒光所需的*少3通道熒光程序，至少對2種目的蛋白的檢測，同時(shí)有第3個(gè)蛋白做對照。
同時(shí)，Alphaview Q的基本光學(xué)成像配置即FluorChem HD2的化學(xué)發(fā)光凝膠成像系統(tǒng)，
已是化學(xué)發(fā)光成像的**配置，即1英寸CCD尺寸，**-25℃的CCD制冷溫度，420萬像素的分辨率，50mm 0.95的大光圈鏡頭，以及*高可達(dá)8×8的CCD像素合并模式和特有的Movie Mode功能等等，通過綜合調(diào)高這些參數(shù)，使其具有極高的化學(xué)發(fā)光成像靈敏度，*高可達(dá)20f克，超過了同位素方法。
不難看出，多色熒光凝膠成像系統(tǒng)FluorChem Q的突出特點(diǎn)是具有*多可進(jìn)行5種熒光染料的檢測和分析，可同時(shí)實(shí)現(xiàn)4種蛋白的高靈敏度定量分析。但，如不考慮多色熒光的功能，其本身也是一套具有極高靈敏度的**化學(xué)發(fā)光凝膠成像系統(tǒng)，因?yàn)椋徽撌枪δ苌系膽?yīng)用目的還是硬件配置上的使用目的，化學(xué)發(fā)光凝膠成像都可謂其基礎(chǔ)。總之，依目前的Western Blot實(shí)驗(yàn)方法和技術(shù)能力，多色熒光凝膠成像系統(tǒng)仍只是化學(xué)發(fā)光凝膠系統(tǒng)的應(yīng)用補(bǔ)充與配置升級。
公安機(jī)關(guān)備案號：
