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細胞培養基既是培養細胞中供給細胞營養和促使細胞生殖增殖的基礎物質，也是培養細胞生長和繁殖的生存環境。動物細胞培養必需的溶液
平衡鹽水（BSS）,Hanks 液和Earle液是常用的BSS基礎溶液。PH調整液：3.7%、5.6%、7.4%的NaHCO3溶液、HEPES溶液（二羥乙基哌嗪乙烷磺酸） 細胞消化液:胰蛋白酶溶液、EDTA溶液、膠原酶溶液。
***溶液
1)青、鏈霉素，每毫升培養液含100U青霉素和100ug鏈霉素。
2)卡那霉素：終濃度為50ug/ml培養液。
3）制霉菌素：濃度25U/ml，小瓶分裝，每瓶一次用完。
常用的動物血清主要有牛血清和馬血清。牛血清分為胎牛血清和犢牛血清，前者來源少，價格高；后者要求剛產下尚未哺乳的小牛，因為哺乳后的小牛血清中可能含有更復雜的成分。血清中已知的成分主要有蛋白質、氨基酸、葡萄糖、**等。蛋白質主要是白蛋白和球蛋白。
氨基酸是細胞合成蛋白質的基本成分，氨基酸中有12種是細胞本身不合成的，必須由培養液提供。**有胰島素、生長**和多種生長因子如表皮生長因子、成纖維細胞生長因子、增殖刺激因子(MSA)、類胰島素生長因子(IGFl、IGF2)等。
水解乳蛋白、膠原是另外兩種較好的天然培養基成分。水解乳蛋白是乳白蛋白的水解產物，呈蛋黃色粉末狀，富含氨基酸。一般配制成0．5%溶液，微酸性。膠原是從動物真皮中提取的，具改善細胞表面特性促使其附著生長的作用。
合成培養基
1951年厄爾開發了供動物細胞體外生長的人工合成培養基(MEM)。合成培養基的種類相當多。合成培養基成分已知，便于對實驗條件的控制。但與天然培養基相比，有些天然的未知成分尚無法用已知的化學成分所替代，因此，細胞培養中使用的基礎合成培養基還必須加入一定量的天然培養基成分，以克服合成培養基的不足。*普遍的作法是加入小牛血清。
動物血清成分復雜，各種生物大小分子混合在一起，有些成分至今尚未搞清楚。血清對細胞生長很有效，但后期對培養產物的分離、提純以及檢測造會成一定困難。另外高質量的動物血清來源有限，成本高，限制了它的大量使用。
無血清培養基不加動物血清，在基礎培養基中加入細胞生長有效因子，**等。
細胞培養基成分
氨基酸
氨基酸是組成蛋白質的基本單位.不同種類的細胞對氨基酸的要求各異,但有幾種氨基酸細胞自身不能合成,必須依靠培養液提供,這幾種氨基酸稱為必需氨基酸.其中谷氨酰胺是細胞合成核酸和蛋白質必需的氨基酸,在缺少谷氨酰胺時,細胞生長**而死亡.因此,各種培養液中都有較大量的谷氨酰胺.但是,由于谷氨酰胺在溶液中很不穩定,應置于-20℃冰箱中保存,在使用前加入培養液內.已含谷氨酰胺的培養液在4℃冰箱中儲存2周以上時,還應重新加入原來量的谷氨酰胺.
碳水化合物
碳水化合物是細胞生長主要能量來源,其中有的是合成蛋白質和核酸的成分.主要有葡萄糖,核糖,脫氧核糖,丙酮酸鈉和醋酸等.
無機鹽
培養液中無機鹽的主要功能是幫助細胞維持滲透壓平衡.此外,通過提供鈉,鉀和鈣離子,幫助細胞調節細胞膜功能.培養液的滲透壓是一個非常重要的因素, 細胞通常可耐受260mOsm/kg 320 mOsm/kg.標準培養液的滲透壓在此范圍內波動.特別注意:向培養液中加入其它物質有可能會明顯改變培養液的滲透壓,特別是溶于強酸或強堿中的物質.向培養液中添加HEPES時需按以下方法調節鈉離子濃度.
緩沖系統
大多數細胞所需pH 在 7.2 - 7.4.但是,細胞培養*適pH值隨培養的細胞種類不同而不同.成纖維細胞喜歡較高pH (7.4 - 7.7), 而傳代轉化細胞系則需要偏酸pH (7.0 - 7.4).由于多數培養液靠碳酸氫鈉(NaHCO3)與CO2體系進行緩沖,因此,氣相中的CO2濃度應與培養液中碳酸氫鈉濃度相平衡.如果氣相或培養箱空氣中CO2濃度設定在5%,培養液中NaHCO3的加入量為1.97g/L;如果CO2濃度維持在10%,培養液中NaHCO3的加入量為3.95g/L.細胞培養瓶蓋不應擰得太緊,以保證氣體交換. HEPES 是一種非離子緩沖液,在pH 7.2 - 7.4 范圍內具有較好的緩沖能力,但是非
常昂貴,在高濃度時對一些細胞可能有毒.HEPES緩沖液可與低水平的碳酸鈉(0.34g/L)共用,以抵消因額外加入HEPES引起的滲透壓增加.在這種培養條件下,細胞培養瓶的蓋子應擰緊,以防止培養液中所需的少量碳酸鹽散入空氣中.大多數培養液中含有酚紅作為pH指示劑,酸性培養液呈橙黃色,堿性培養液呈深紅色.
維生素
在細胞培養中,盡管血清是維生素重要來源, 但是許多培養基中添加了各種維生素以適合更多的細胞系生長.
其它成分
在一些較為復雜的培養液中還包括其它一些成分.如在雜交瘤技術中常用的DMEM培養液,使用時還需要補加丙酮酸鈉和2-巰基乙醇(2-Mercaptoethanol,2-Me).2-Me 對細胞生長有很重要的作用.有人認為它相當于胎牛血清,有直接刺激細胞增殖作用.2-Me的活性部分是硫氫基,其中一個重要作用是使血清中含硫的化合物還原成谷胱甘肽,能誘導細胞的增殖,為非特異性的激活作用.同時避免過氧化物對培養細胞的損害.另一個重要作用是促進分裂原的反應和DNA合成,增加植物凝集素(PHA)對**細胞的轉化作用,已廣泛應用于雜交瘤技術,另外,也開始用于一些難以培養的細胞.2-Me是一種小分子還原劑,極易氧化.分子量為78.13,純的2-Me是一種無色有刺激味的液體,比重為1.110-1.120(Do20),常用終濃度為5×10-5M.常配制成0.1M的儲存液,用時每升培養液加0.5ml.
（上海拜力生物編輯整理）
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