由于臨床檢驗工作量不斷增加,**傳染性對工作人員構成的危險因素加大,同時對工作效率要求越來越高,因此對檢驗自動化要求越迫切。七十年代起 全自動生化分析儀 開始出現在臨床實驗室,到了九十年代**分析技術已日趨成熟,熒光偏振、增強化學發光、電化學發光等分析技術不斷引入到**分析系統,這些**分析技術不但有較高靈敏度,而且特異性也較好,具有一定的抗干擾能力。
一、熒光偏振(FPIA):用熒光素標記的示蹤物與分析物的復合體經單一平面偏振光照射后,可發出單一平面的偏振熒光,此熒光在特定偏振面的強度與復合體受激發時的轉動速度成反比,而轉動速度與分子量的大小成反比。當熒光標記的示蹤物與分析物的復合體結合后,分體對相應大分子抗體進行競爭性結合,使游離的復合體增多,而復合體轉動速度較高,這樣在特定偏振面上檢測到的熒光強度較低,反之檢測到的熒光強度就會較高。因此通過檢測在特定偏振面上的熒光強度的高低就可得到待檢血清中分析物的濃度。這種方法的優點是靈敏高,線性范圍廣,有較好的**度。
二、增強化學發光(EC):將生物素化的(Biotinylated)**抗體通過親合素(Streptavidin)包被于反應杯內表面上,當待測物與之結合后,再加入用辣根過氧化物酶(Horseradish Peroxidase,HRP)標記的**抗體,與普通化學發光原理不同之處是采用了一種特殊的催化劑與發光醇(Luminol)及其它試劑一道加入后,可使辣根過氧化物酶氧化發光醇的反應速度提高103倍以上。從而使方法學的靈敏度大大提高。
三、電化學發光(ECL):基本原理與化學發光相同,與普通化學發光技術的不同在于采用特殊的標記物:聯吡啶釕(Ru(bpy))2+.在三丙胺陽離子自由(TPA+)的催化及脈沖電壓的激發下,此標記物可產生高效、穩定的邊續發光。同時,由于(Ru(bpy))2+.在反應中可循環利用,使發光得以增強和穩定。這種方法的主要優點是標記物分子小且穩定性較好,發光強度高,發光時間長。
四、時間分辯熒光(TRFIA):原理和熒光**分析基本相同,只是標記物和信號的測量不同。采用三價稀土離子做示蹤劑,稀土離子通過螯合劑與抗體分子上的游離氨基共價結合,形成稀土離子-螯合劑-抗體標記螯合物,用建立雙抗體夾心**分析。當采用酸性增強液將稀土離子從**復合物中解離出來,并與增強液中的主要成份形成微囊,當被激發光激發后,稀土離子可以發出長壽命的極強的熒光信號。主要優點為:
1、由于稀土離子熒光激發光波長范圍寬,發射光波窄,激發光和發射光之間有較大的位移,因此有利于提高激發能。排除非特異熒光干擾,增強熒光信號的特異性。
2、稀土離子標記螯合物具有較高的穩定性,標記離子不易脫落,穩定期可達1-2年。
3、由于稀土離子螯合物所產生的熒光不僅強度高,而且壽期長,因此利用延緩測量時間,可以排除待測樣本或試劑中短壽合的自然熒光干擾。
資料來源于 半自動生化分析儀 生產廠家普朗醫療網編--http://www.518center.com/
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